蛋白結(jié)晶板發(fā)展

獲得晶體及提高晶體質(zhì)量是蛋白質(zhì)結(jié)晶方法學(xué)中的兩大基本問題.為解決這兩個問題,結(jié)構(gòu)生物學(xué)家已發(fā)展了許多方法,其中針對蛋白質(zhì)本身進行分子改造是非常重要的方法之一.通過蛋白質(zhì)工程技術(shù),如突變,還原化修飾,剪切或刪除構(gòu)象柔性環(huán)區(qū),融合蛋白,復(fù)合物共結(jié)晶,原位蛋白質(zhì)水解等方法對蛋白質(zhì)本身進行分子改造,可明顯提高其結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量.隨著該方面成功案例的不斷積累,分子改造技術(shù)越來越凸顯出其在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析中的重要作用,特別是對一些難以結(jié)晶或提高晶體質(zhì)量的蛋白質(zhì)而言,其應(yīng)用價值更不可忽視.針對近年來分子改造技術(shù)在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的應(yīng)用進行了回顧與總結(jié),并展望了其未來的發(fā)展。

蛋白質(zhì)晶體板相互作用

蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)層次蛋白中的多肽鏈往往不是一個如圖4圖4所示完全伸展的鏈。L.C.鮑林和R.B.科里曾由氨基酸、小肽和有關(guān)化合物晶體結(jié)構(gòu)的測定中歸納了肽鍵的鍵長、鍵角等。鏈中肽鍵N-C的鍵長為1.32埃，具有40%的雙鍵成分，與周圍四個鍵是共面的，且N-H和C=O具有反式構(gòu)型。肽鍵因具雙鍵成分而無旋轉(zhuǎn)的自由，但它周圍的每個Cα原子與相鄰兩個肽鍵中的氮和碳原子所形成的Cα-N和Cα-C單鍵都具有較大的回旋余地，從而一個多肽鍵可能存在于不計其數(shù)的構(gòu)象或立體結(jié)構(gòu)中，其中有些構(gòu)象使未成鍵原子間形成較多較強的氫鍵并產(chǎn)生其他能使整個分子趨于穩(wěn)定的相互作用。

蛋白結(jié)晶板使用

蛋白質(zhì)是水產(chǎn)品的主要組分,其含量測定在水產(chǎn)品加工及研究等方面應(yīng)用極為廣泛.目前,各蛋白含量快速測定方法通常是在試管中進行反應(yīng)并應(yīng)用分光光度計測定,其操作過程較繁瑣,分析大批量樣品時效率低,上述缺點在高通量篩選、檢測等場合尤為突出.為了克服該不足,實現(xiàn)蛋白含量的快速高通量測定,本研究基于Folin-酚法,利用96孔板作為反應(yīng)器并配合比色,建立了一種蛋白含量測定的微孔板方法并評價其合理性.該法測得樣品的蛋白含量與常規(guī)法結(jié)果無顯著性差異,反應(yīng)在30-90 min顯色穩(wěn)定,標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9922,標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.07%-0.78%,檢測限為10 μg.與常規(guī)法相比,微孔板法保持了Folin-酚法的準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性,同時具有通量高、節(jié)省樣品、試劑及測定時間等優(yōu)點,在蛋白高通量快速測定方面更具優(yōu)勢。