蛋白質(zhì)結(jié)晶涉及四個(gè)重要步驟

1. 蛋白質(zhì)純度的確定。如果不夠非常純，必須要進(jìn)一步純化。

2. 蛋白質(zhì)溶解于合適的溶劑中，從中它能通過一種鹽或有機(jī)化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液，有時(shí)加，如2--2，4-（MPD）。正常情況下，沉淀劑也被加入，但是濃度不高于使沉淀產(chǎn)生。對(duì)于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白，還需要加入去污劑。

3. 使溶液過飽和。在這一步中，小聚集體形成，它是晶體生長所需的核。對(duì)小分子的結(jié)晶來說，相比于蛋白質(zhì)更為人熟知，晶核的自發(fā)形成需要提供表面張力能。一旦這個(gè)能障被突破了，晶體開始生長。能障在高水平的過飽和度時(shí)很容易克服。因此，在高過飽和度時(shí)，晶核更易自發(fā)形成。晶核的形成可作為一個(gè)過飽和度和其他參數(shù)的函數(shù)通過多種方法來研究，包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。

4. 一旦晶核形成，晶體生長正式開始。對(duì)低分子量的化合物而言，新分子會(huì)逐步結(jié)合到正在生長的晶體表面。這是由于這些位置的結(jié)合能比較大，相對(duì)于分子結(jié)合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成，要么發(fā)生在表面隨機(jī)形成的晶核。

蛋白結(jié)晶板

為滿足固相時(shí)間分辨熒光分析(TRFIA)研究需要,采用固相載體改進(jìn)技術(shù)研制用于檢測系統(tǒng)的聚微孔板,不僅提高TRFIA系統(tǒng)的靈敏度,而且可以把該技術(shù)應(yīng)用到其他分析技術(shù)、生物芯片技術(shù)、污水處理、發(fā)酵工藝、酶工程和親和層析,具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本文將聚微孔板內(nèi)表面固相功能化,研制一種在聚微孔板內(nèi)表面形成耐受強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、的尼龍-6膜層,并在膜層表面化得到活性基團(tuán)與己二酸二酰肼進(jìn)行“手臂”連接,用雙功能基團(tuán)活化,活化后的膜層與蛋白質(zhì)具有很高的連接性能和穩(wěn)定性。

蛋白質(zhì)分子的三維結(jié)構(gòu)是生命科學(xué)研究中極為重要的信息,X射線單晶衍射技術(shù)是目前獲得結(jié)構(gòu)信息的手段,但如何篩選到個(gè)蛋白晶體是該技術(shù)必需的步,也是制約結(jié)構(gòu)生物學(xué)發(fā)展的主要瓶頸問題之一.現(xiàn)在一般通過規(guī)模篩選的方法從眾多的溶液中篩選出可結(jié)晶的條件,但是工作量較大,效率也不高.回顧了近年來在提高結(jié)晶篩選效率方向取得的成就。

蛋白結(jié)晶板技術(shù)

提出來的一項(xiàng)新型的分析技術(shù),是當(dāng)前分析科學(xué)活躍的發(fā)展領(lǐng)域之一,代表了新世紀(jì)分析儀器的發(fā)展方向。微流控芯片的發(fā)展有賴于不斷出現(xiàn)的微機(jī)電加工技術(shù),微流控芯片的結(jié)構(gòu)越來越復(fù)雜,功能也越來越多樣化,由此,研究和探索簡便的加工技術(shù)成為微流控技術(shù)發(fā)展的一個(gè)重要組成部分,本的研究工作將圍繞著微流控蛋白質(zhì)結(jié)晶芯片不同材料的性能與功能要求來進(jìn)行相關(guān)加工技術(shù)的探討。 蛋白質(zhì)結(jié)晶微流控芯片是一種用于蛋白質(zhì)結(jié)品條件高通量、快速篩選的新設(shè)備,對(duì)于結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展具有重要意義,是目前研究的熱點(diǎn)。本根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)晶系統(tǒng)的要求,設(shè)計(jì)了具有雙層結(jié)構(gòu)的微流控芯片。