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蛋白質(zhì)結(jié)晶涉及四個(gè)重要步驟
1. 蛋白質(zhì)純度的確定。如果不夠非常純,必須要進(jìn)一步純化。
2. 蛋白質(zhì)溶解于合適的溶劑中,從中它能通過(guò)一種鹽或有機(jī)化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液,有時(shí)加,如2--2,4-(MPD)。正常情況下,沉淀劑也被加入,但是濃度不高于使沉淀產(chǎn)生。對(duì)于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白,還需要加入去污劑。
3. 使溶液過(guò)飽和。在這一步中,小聚集體形成,它是晶體生長(zhǎng)所需的核。對(duì)小分子的結(jié)晶來(lái)說(shuō),相比于蛋白質(zhì)更為人熟知,晶核的自發(fā)形成需要提供表面張力能。一旦這個(gè)能障被突破了,晶體開(kāi)始生長(zhǎng)。能障在高水平的過(guò)飽和度時(shí)很容易克服。因此,在高過(guò)飽和度時(shí),晶核更易自發(fā)形成。晶核的形成可作為一個(gè)過(guò)飽和度和其他參數(shù)的函數(shù)通過(guò)多種方法來(lái)研究,包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。
4. 一旦晶核形成,晶體生長(zhǎng)正式開(kāi)始。對(duì)低分子量的化合物而言,新分子會(huì)逐步結(jié)合到正在生長(zhǎng)的晶體表面。這是由于這些位置的結(jié)合能比較大,相對(duì)于分子結(jié)合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成,要么發(fā)生在表面隨機(jī)形成的晶核。
蛋白質(zhì)晶體板結(jié)構(gòu)
研究蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)的晶體學(xué)分支學(xué)科。蛋白質(zhì)是由眾多的α-氨基酸作為單體縮合而成的多肽鏈通過(guò)交聯(lián)構(gòu)成的。多肽鏈的氨基酸及其交聯(lián)位置代表蛋白質(zhì)分子的一級(jí)結(jié)構(gòu),而多肽鏈按一定方式在空間分布則形成二級(jí)結(jié)構(gòu)(如α-螺旋和早折疊片等)和三級(jí)立體結(jié)構(gòu)(如多肽鏈折疊為球形),作為亞基的三級(jí)結(jié)構(gòu)還可聚集成四級(jí)結(jié)構(gòu)等。
蛋白結(jié)晶板使用
在基因組、蛋白質(zhì)組、納米技術(shù)中,結(jié)晶學(xué)是一門(mén)關(guān)鍵的科學(xué)。在這些研究領(lǐng)域中,通過(guò)X射線(xiàn)進(jìn)行單晶結(jié)構(gòu)分析來(lái)探測(cè)分子的三維結(jié)構(gòu)是很重要的技術(shù)。其中大分子晶體研究是主要的挑戰(zhàn),GREINER生產(chǎn)一系列的產(chǎn)品來(lái)滿(mǎn)足這一應(yīng)用。
有一平臺(tái),平臺(tái)中有一個(gè)方形平底的結(jié)晶池,用于接收樣品,
每池容量3.9μl池底透明。
標(biāo)準(zhǔn)形板,方形池:96孔,方形孔,孔容量320μl,孔底磨砂不透明.每一孔中設(shè)計(jì)
有一平臺(tái),平臺(tái)中有三個(gè)方形平底的結(jié)晶池,用于接收樣品,每池
容量4.1μl,池底透明.
標(biāo)準(zhǔn)形板,圓形池:96孔,方形孔,孔容量320μl,孔底磨砂不透明.每一孔中設(shè)計(jì)有一
平臺(tái),平臺(tái)中有三個(gè)圓形U底的結(jié)晶池,用于接收樣品,每池容量