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洋蔥亞細(xì)胞定位培養(yǎng)電話「思特進(jìn)」

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發(fā)布時(shí)間:2021-03-27 07:01  






武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;qRT-PCR分析結(jié)果表明PnCHI1在T2代轉(zhuǎn)基因中大量表達(dá),同時(shí)葉片接種實(shí)驗(yàn)顯示PnCHI1轉(zhuǎn)基因?qū)η迅牭毒目剐栽鰪?qiáng)明顯。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。




大豆是重要的油料作物和植物蛋白質(zhì)資源,在食品工業(yè)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。大豆花葉病毒病分布非常廣泛,是一種世界害,它嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量和外觀品質(zhì)。亞可誘導(dǎo)酵母細(xì)胞,細(xì)胞率隨處理濃度的升高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高。目前主要通過(guò)適當(dāng)改變播種時(shí)期、選用抗病品種、防蚜等措施來(lái)降低大豆花葉病毒(SMV)對(duì)大豆產(chǎn)量的影響,國(guó)內(nèi)外從遺傳工程角度來(lái)探索抗SMV途徑的還很少。類甜味蛋白(Thaumatin-like proteins,TLP)是第5類植物病程相關(guān)蛋白,在離體條件下具有很強(qiáng)的抑菌活性。以往關(guān)于類甜味蛋白的抗病研究都限于抗真菌,本研究探討了其與花葉病毒抗性之間的相關(guān)性。GmTLP是本研究從大豆品種科豐1號(hào)中利用SMV誘導(dǎo)的雙向電泳技術(shù)分離的類甜味蛋白編碼基因,在大豆中存在兩個(gè)拷貝,分別命名為GmTLP1和GmTLP2。本文對(duì)GmTLP1在植物中的表達(dá)及功能進(jìn)行了初步研究。研究結(jié)果如下:1實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,在SMV誘導(dǎo)4h、8h、24h、48h時(shí),GmTLP1基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)量明顯上升,說(shuō)明在mRNA水平上該基因是響應(yīng)SMV誘導(dǎo)的,并且響應(yīng)模式為雙峰模式。 2半定量RT-PCR結(jié)果顯示,GmTLP1在大豆根、莖、葉、莢中均有表達(dá),只是莢中表達(dá)量相對(duì)低一些。3構(gòu)建綠色熒光蛋白融合表達(dá)載體,利用根癌農(nóng)法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。


武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。囚此本研究以剛毛檉柳(Tamarixhispida)的轉(zhuǎn)錄因子ThDREB和翻譯起始因子TheIFIA兩個(gè)基因?yàn)檠芯繉?duì)象,對(duì)基因的表達(dá)和功能進(jìn)行了初步研究,以期為抗逆基因工程育種提供理論依據(jù)和基因材料。





洋蔥(Allium cepa L.)屬百合科蔥屬,是世界主栽蔬菜之一,也是我國(guó)主要的出口蔬菜之一。序列對(duì)比分析表明,在楊樹(shù)當(dāng)中,PtWRKY89與AtWRKY70高度同源,然而,對(duì)于PtWRKY89生物學(xué)功能的研究至今尚未報(bào)道。FT(FLOWERING LOCUS T)基因是開(kāi)花植物光周期反應(yīng)過(guò)程中調(diào)控植物成花的關(guān)鍵基因,也是重要的開(kāi)花整合因子。實(shí)驗(yàn)室在前期工作中已經(jīng)成功了洋蔥的開(kāi)花素類似基因Ac FT1及Ac LFT,為確定其功能,本試驗(yàn)分別構(gòu)建了Ac FT1及Ac LFT的正義、反義和RNAi干擾的植物表達(dá)載體,通過(guò)凍融法導(dǎo)入到根癌農(nóng)EHA105中,進(jìn)而通過(guò)花序侵染法轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中。通過(guò)熒光定量PCR法測(cè)定Ac FT1及Ac LFT在擬南芥抽薹前葉片中的相對(duì)表達(dá)含量,觀察轉(zhuǎn)化植株的形態(tài)學(xué)指標(biāo),繼而確定Ac FT1及Ac LFT在洋蔥成花中的作用,為實(shí)現(xiàn)洋蔥抽薹開(kāi)花的基因調(diào)控提供參考。試驗(yàn)結(jié)果歸納如下:⑴構(gòu)建了Ac FT1的正義植物表達(dá)載體p Z-Ac FT1,反義植物表達(dá)載體p R-AcFT1,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac FT1;構(gòu)建了AcLFT的正義植物表達(dá)載體p Z-AcLFT,反義植物表達(dá)載體p R-Ac LFT,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac LFT.;⑵利用凍融法將重組質(zhì)粒p Z-Ac FT1、p R-Ac FT1、p RNAi-Ac FT1、p Z-Ac LFT、p R-Ac LFT、p RNAi-Ac LFT導(dǎo)入根癌農(nóng)EHA105中,利用花序侵染法對(duì)擬南芥進(jìn)行轉(zhuǎn)化。


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采用根癌農(nóng)介導(dǎo)的方法,以農(nóng)介導(dǎo)絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的載體PCH-sGFP對(duì)尖孢鐮刀菌甘藍(lán)?;蛢蓚€(gè)生理小種進(jìn)行轉(zhuǎn)化,該載體含有報(bào)告基因—綠色熒光蛋白基因(gfp)和篩選基因—潮磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hph).獲得轉(zhuǎn)化菌株后,經(jīng)檢測(cè)表明:T-DNA目的片段成功整合到枯萎病菌基因組中,并且單孢繼代培養(yǎng)6代后熒光蛋白仍能穩(wěn)定遺傳.對(duì)轉(zhuǎn)化菌株的生長(zhǎng)速度和致病力進(jìn)行分析,結(jié)果表明:菌株和轉(zhuǎn)化菌株在生長(zhǎng)速度和致病力上沒(méi)有顯著差異.因此,轉(zhuǎn)化菌株可用于甘藍(lán)枯萎病菌的組織病理學(xué)研究.


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