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HPLC定性分析的主要方法與技術(shù)。

使用保留值定性方法

在所有定性分析方法中， HPLC使用保留值定性分析的方法是基本的方法，他就是合理地運(yùn)用色譜的一些基本知識(shí)對(duì)有機(jī)化合物所作的反應(yīng)，從而得出有機(jī)化合物應(yīng)具有的性質(zhì)。HPLC中，兩種相同的物質(zhì)在同一色譜中應(yīng)具有相同的保留值，因此， HPLC中的定性分析就能充分地應(yīng)用到這一原理，用相同的色譜對(duì)未知物質(zhì)進(jìn)行簡(jiǎn)單的成分和性質(zhì)判斷，同時(shí)在同一物質(zhì)組分下色譜上形成的未知峰保留值也是一樣的，這樣就可以初步判定未知有機(jī)化合物。HPLC的流動(dòng)相在此基礎(chǔ)上，適當(dāng)改變流動(dòng)相來(lái)判斷未知有機(jī)化合物的基本性質(zhì)，而在連續(xù)變化的過程中，當(dāng)發(fā)現(xiàn)兩個(gè)保留值峰值相同時(shí)，我們可以簡(jiǎn)單地判斷為未知有機(jī)化合物的性質(zhì)相同。盡管 HPLC的保留值定性分析方法可以區(qū)分同樣的物理性質(zhì)，但不能保證具有相同保留值的兩個(gè)有機(jī)化合物是同一種物質(zhì)，因此在實(shí)際應(yīng)用中， HPLC利用保留值定性分析的方法雖然簡(jiǎn)單，而且很具操作性，但適用范圍較窄，不能適應(yīng)更多未知有機(jī)化合物的性質(zhì)判定。

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一九四一年，瑪?shù)俣鞯葘柡凸枘z作為固定相，用含乙醇的作為流動(dòng)相，分離乙酰基氨基酸是個(gè)應(yīng)用分配色譜。在總結(jié)已有成果的基礎(chǔ)上，提出了的色譜塔板理論。

液固色譜是先創(chuàng)立的色譜方法，初大多采用碳酸鈣、硅膠、氧化鋁填充的玻璃柱管，其流動(dòng)相加于柱管±端，靠重力作用下移；組分檢測(cè)依賴肉眼觀察或?qū)⑽絼闹苤腥〕觯龠M(jìn)行進(jìn)一步分析。液-固色色譜問世50多年來(lái)，在液-固色色譜設(shè)備上還沒有實(shí)質(zhì)性的進(jìn)步。20世紀(jì)60年代以前，隨著 GC知識(shí)的積累， GC的系統(tǒng)理論和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)被應(yīng)用到液相色譜研究中，開發(fā)出細(xì)粒度填充色譜柱，大大提高了液相色譜的分離能力。用高壓泵輸送流動(dòng)相代替重力作用，提高了柱的效率，加快了液相色譜分析的速度。LC和光學(xué)檢測(cè)器的結(jié)合，使它從初的以分離為主要目的，發(fā)展成為同時(shí)完成分離分析任務(wù)的重要分析手段。

伴隨著固定相的發(fā)展和裝柱技術(shù)的發(fā)展，液相色譜柱效不斷提高。此外，還提出了以精細(xì)粒徑固定相為基礎(chǔ)的 HPLC的應(yīng)用。

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色譜法是一種色譜法。層析法有兩種相，一相為流動(dòng)相，另一相為固定相。如液體為流動(dòng)相，則稱為液相色譜，而流動(dòng)相為氣體，稱為氣相色譜。

氣體色譜法的優(yōu)點(diǎn)：

①分選效i率高，分析速度快，如能在2小時(shí)內(nèi)將汽i油樣品分離出200多個(gè)色譜峰，一般分析樣品20分種即可完成。

②氣樣用量少，檢測(cè)靈敏度高，如氣樣用量1毫升，液體樣品用量0.1微升固體樣品的用量為幾微克。使用合適的檢測(cè)儀可以檢測(cè)到百萬(wàn)分之十到十億分之一的雜質(zhì)。

③選擇性好，可分離、分析恒沸混合物，具有相似沸點(diǎn)的物質(zhì)、某些同位素、順式異構(gòu)體鄰、間、對(duì)位異構(gòu)體、旋光異構(gòu)體等。

④適用范圍廣，雖然主要用于各種氣體及易揮發(fā)有機(jī)物的分析，但在一定條件下，還可對(duì)高沸物和固體樣品進(jìn)行分析。主要應(yīng)用領(lǐng)域?yàn)槭凸I(yè)、環(huán)境保護(hù)、臨床化學(xué)、制藥和食品工業(yè)。

氣體色譜法缺陷

當(dāng)對(duì)成分進(jìn)行直接定性分析時(shí)，必須以已知或已知數(shù)據(jù)與相應(yīng)色譜峰相比較，或與其它方法(如質(zhì)譜、光譜)結(jié)合使用，才能得到直接確定的結(jié)果。定量時(shí)，常常需要用已知物純樣品對(duì)被測(cè)信號(hào)進(jìn)行校正。

原則：

GC分析是一種多組份混合物的分離、分析技術(shù)。用氣體作為流動(dòng)相(載氣)，當(dāng)樣晶被送入進(jìn)樣器并氣化后，由載氣攜帶到填充柱或毛細(xì)柱，由于樣晶中各組份的沸點(diǎn)、極性和吸附系數(shù)的差異，使各組份在柱中被分離，然后被撞擊到柱后的檢測(cè)器根據(jù)各組份的物理化學(xué)特性，將轉(zhuǎn)換后的電信號(hào) I固序檢測(cè)出來(lái)，將轉(zhuǎn)換后的電信號(hào)送到色譜工作站，由色譜工作站對(duì)各組份進(jìn)行分析，得到各組份的分析結(jié)果。

特征：

1.全自動(dòng)在結(jié)式非甲皖總怪分析系統(tǒng)，具有控制、數(shù)據(jù)采集、積分計(jì)算、數(shù)據(jù)上傳等功能

2.可實(shí)現(xiàn)意外斷電、回電后，微電腦、儀器控溫、儀器分析、數(shù)據(jù)上傳等功能將自啟動(dòng)

3.能在 FID意外滅火后自動(dòng)切斷氫氣并報(bào)警

4.能同時(shí)分析全怪、甲皖、苯系物等多種氣體

5.色譜組分的標(biāo)定、分析、實(shí)時(shí)顯示、維護(hù)等功能，通過簡(jiǎn)潔的界面操作完成

6.軟件界面簡(jiǎn)潔易用