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三(羥)Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會被去質(zhì)子化,從而提高其溶解性。人們常常在Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。如果將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),而換成硼酸則獲得“TBE緩沖液這兩種緩沖液通常用于核酸電泳實驗中。
此外,一些緩沖體系對溫度非常敏感,例如Tris-HCl緩沖液,如果你在25℃時將緩沖體系調(diào)至pH值8,pH值將在5℃時增加到8.58而在37℃時降到7.71。所以,如果打算在4℃條件下保存蛋白或在37℃進行實驗,就應(yīng)該考慮到室溫下調(diào)的pH值可能在實驗條件中就不適用了。 其他類型的色譜分離柱,如凝膠過濾柱和Ni2 親和層析柱,可能需要更高的鹽濃度。我一般用高達500 mM NaCl進行高鹽淋洗,以防止蛋白和柱之間的非特異性結(jié)合。
8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L(KCl):溶解7.46g于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。