關(guān)于抗體的選擇

蛋白特異性：針 對(duì)需要檢測(cè)的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測(cè)，對(duì)抗體的要求是不一樣的，注意查看抗體說明書的檢測(cè)說明。如果重組蛋白不 是全長表達(dá)，則需要注意抗體的免yi原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對(duì)，并結(jié)合抗體免 yi原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測(cè)需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在，不宜一概而論。

抗體保存注意事項(xiàng)：大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過程需要1-2 周的時(shí)間，所以是在4 度的條件下來完成的。4 度運(yùn)輸zui主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害(如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程)。所以運(yùn)輸過程中避免干冰運(yùn)輸！特殊抗體的保存條件：1. 酶聯(lián)抗體：永遠(yuǎn)保存在4 度，避免凍起來。否則會(huì)導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失。2. 偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體，對(duì)光極為敏感，因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的！

   如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)？

   首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：（1）熱滅huo血清；（2）在 37℃下培養(yǎng)血清；（3）反復(fù)凍融；（4）γ射線照射；（5）長期儲(chǔ)存在 2-8℃；（6）在室溫下放置時(shí)間過長。

    如何去除血清中的沉淀？

    如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。