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MTT檢測法,細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶,能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan),并沉積在細(xì)胞中,死細(xì)胞則無此現(xiàn)象。接著用二甲亞砜(DMSO)溶解沉積在細(xì)胞中的甲瓚后,可利用酶標(biāo)490nm波長測光吸收值,依據(jù)吸光值(OD值)計算出細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),吸光值與細(xì)胞活性成正比。
大多數(shù)大規(guī)模生產(chǎn)都是小規(guī)模生產(chǎn)的直接放大,即通過增加培養(yǎng)/生產(chǎn)單元來實現(xiàn)。生產(chǎn)基本上采用大量的多層培養(yǎng)系統(tǒng)(Cell Factories(CF)(CF-10))或者Cell Stacks(CS)因為易于操作,10疊層裝置(CS-10)是選,雖然原則上40疊層裝置同樣也可以用,但是因為它重量增加的原因所以需要特殊的處理系統(tǒng)。此外,每層平板的氣體交換及培養(yǎng)基層不可能一致,因此用顯微鏡控制40疊層裝置細(xì)胞的生長很困難。生產(chǎn)要么采用放在層流工作臺的開放模式,要么采用半封閉模式,后者對操作人員、環(huán)境及終產(chǎn)品的安全性更高。
在生物反應(yīng)器中生產(chǎn)需要對懸浮的生產(chǎn)細(xì)胞擴大培養(yǎng)。多個用于生產(chǎn)慢病毒的細(xì)胞系(293T、293FT、293SF-3F6)被報道易于在化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基(Freestyle 293 and F17, Invitrogen, Carlsbad, CA; HyQSFM4TransFx293, Hyclone, Logan, UT)中適應(yīng)懸浮培養(yǎng)。這些細(xì)胞可以在沒有為載體的情況下迅速懸浮生長,這使得它們的培養(yǎng)和擴大比貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞容易很多。此外,培養(yǎng)基中沒有其他動物來源的組分是臨床生產(chǎn)合適的情況,它可以降低被外源物質(zhì)污染的風(fēng)險。