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在生物反應(yīng)器中生產(chǎn)需要對懸浮的生產(chǎn)細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)。多個用于生產(chǎn)慢病毒的細(xì)胞系(293T、293FT、293SF-3F6)被報道易于在化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基(Freestyle 293 and F17, Invitrogen, Carlsbad, CA; HyQSFM4TransFx293, Hyclone, Logan, UT)中適應(yīng)懸浮培養(yǎng)。這些細(xì)胞可以在沒有為載體的情況下迅速懸浮生長,這使得它們的培養(yǎng)和擴(kuò)大比貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞容易很多。此外,培養(yǎng)基中沒有其他動物來源的組分是臨床生產(chǎn)合適的情況,它可以降低被外源物質(zhì)污染的風(fēng)險。
細(xì)胞膜包著的黏稠透明的物質(zhì),叫做細(xì)胞質(zhì)(Cytoplasm)。在細(xì)胞質(zhì)中還可看到一些帶折光性的顆粒,這些顆粒多數(shù)具有一定的結(jié)構(gòu)和功能,因此叫做細(xì)胞器。例如,在綠色植物的葉肉細(xì)胞中,能看到許多綠色的顆粒,這就是一種細(xì)胞器,叫做葉綠體。綠色植物的光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的。在細(xì)胞質(zhì)中,往往還能看到一個或幾個液泡,其中充滿著液體,叫做細(xì)胞液。在成熟的植物細(xì)胞中,液泡合并為一個中央大液泡,其體積占去整個細(xì)胞的大半。細(xì)胞質(zhì)被擠壓為一層,細(xì)胞膜以及液泡膜和兩層膜之間的細(xì)胞質(zhì)稱為原生質(zhì)層。
提高多肽穩(wěn)定性的途徑:(1)定點(diǎn)突變 :通過基因工程手段替換引起多肽不穩(wěn)定的殘基或引入能增加多肽穩(wěn)定性的殘基,可提高多肽的穩(wěn)定性。(2)化學(xué)修飾:多肽的化學(xué)修飾方法很多,研究多的是PEG修飾。PEG是一種水溶性高分子化合物,在體內(nèi)可降解,無毒。PEG與多肽結(jié)合后能提高熱穩(wěn)定性,抵抗蛋白酶的降解,降低抗原性,延長體內(nèi)半衰期。選擇合適的修飾方法和控制修飾程度可體質(zhì)或提高原生物活性。