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結(jié)合BI生產(chǎn)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,Minimal Essential Medium是基本的培養(yǎng)基, 設(shè)計之初是為了培養(yǎng)HeLa細胞以及部分哺乳類的成纖維細胞。MEM含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素,適合多種細胞單層生長。以MEM為基礎(chǔ),Stanner利用Earle'sBalanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)進一步配制成MEM-Alpha培養(yǎng)基,可廣泛用于哺乳動物細胞的培養(yǎng)。
Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是目前常使用的改良式Eagle's培養(yǎng)基。DMEM與MEM含有相同的營養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍。主要用于快速生長的細胞,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種。DMEM含更高濃度的NaHCO3,要用10%的CO?來平衡,當然也可以在較低CO?濃度下使用。DMEM-高糖(標準型)更適合高密度懸浮細胞培養(yǎng)。適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的培養(yǎng),也可用于雜交瘤中瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞的培養(yǎng)。
細胞為何總是喜歡抱團?1,細胞死釋放出DNA,纏繞其他細胞,形成黏性的細胞團(消化的過程可能過于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太強或有毒性等)。2,細胞離心速度過大或時間太長。3,消化不完全的時候,細胞和細胞之間的連接沒有分開;消化過度的時候,圓形的細胞容易聚堆,再分開很困難!4,狀態(tài)不好、老化的細胞,也可能會出現(xiàn)抱團生長的情況(比如換液不及時、長的太滿才傳代、污染等造成的細胞狀態(tài))。5,傳代后細胞鋪板不均勻。
細胞衰老的檢測:1.DNA損傷檢測,在衰老細胞中會啟動DNA 損傷信號p53,細胞衰老通路p53是被細胞DNA損傷而受到DNA損傷回應(yīng)通路的激。2. β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal)活性染色,β-半乳糖苷酶主要位于溶酶體, 當細胞衰老發(fā)生時, 溶酶體膨脹并且增多, β-半乳糖苷酶明顯積累在溶酶體中, 因此SA-β-gal染色法為檢測細胞衰老普遍常見的指標。不過在一些特殊情況下,例如,饑餓引發(fā)的細胞休眠(quiescence)也會出現(xiàn)SA-β-gal染色呈現(xiàn)陽性。