結(jié)合BI生產(chǎn)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，Minimal Essential Medium是基本的培養(yǎng)基, 設(shè)計之初是為了培養(yǎng)HeLa細胞以及部分哺乳類的成纖維細胞。MEM含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，適合多種細胞單層生長。以MEM為基礎(chǔ)，Stanner利用Earle'sBalanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)進一步配制成MEM-Alpha培養(yǎng)基，可廣泛用于哺乳動物細胞的培養(yǎng)。

支原體染預(yù)防，俗話說，預(yù)防勝于治，所以操作的器材與環(huán)境消毒也至關(guān)重要：1.超凈工作臺預(yù)防，BI也提供Pharmacidal (貨號: IC-110100)作為相應(yīng)的處理試劑，Pharmacidal可有效預(yù)防真菌（和孢子），細菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。Pharmacidal不需稀釋，每次使用超凈工作臺前或每天噴灑一次臺面，二氧化碳培養(yǎng)箱每兩周一次噴灑消毒，噴灑后讓其自然風(fēng)干，無需擦拭。

CFSE是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有細胞膜通透性，能夠自由進入細胞；當(dāng)CFSE擴散穿過細胞膜，會與細胞內(nèi)源酯酶產(chǎn)生水解反應(yīng)而被激發(fā)，發(fā)出綠色熒光，這些帶熒光的CFSE會進一步與細胞骨架蛋白結(jié)合，形成穩(wěn)定的胞內(nèi)熒光蛋白。每當(dāng)細胞進行分裂增殖，胞內(nèi)熒光蛋白會被平均分配到下一代細胞中，因此細胞熒光強度會隨著增殖代數(shù)增加而不斷地降低，可用流式細胞儀進一步偵測分析得出細胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度，對于終判斷細胞增殖結(jié)果有直接性的影響！

細胞培養(yǎng)時可能導(dǎo)致衰老的原因：1.細胞傳代次數(shù)比較多，一定要控制細胞傳代次數(shù)！大量擴增細胞，將細胞進行凍存，在必要的時候重新復(fù)蘇。2.胰酶消化時間太長，胰酶消化時間過長容易導(dǎo)致細胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松;細胞傳代時需要留意胰酶消化的時間。消化過度，在消化細胞時會對細胞的表面蛋白有較強的損傷，所以消化的時間不能過長，建議使用合適濃度和pH值的消化酶，否則會導(dǎo)致細胞衰老和分化。