農(nóng)bacillus轉化法

　　農(nóng)bacillus包括引起植物冠癭瘤的根癌農(nóng)bacillus和引起發(fā)根病的發(fā)根農(nóng)桿1菌。根癌農(nóng)桿1菌和發(fā)根農(nóng)bacillus有相似的遺傳背景。在農(nóng)bacillus介導的轉化中，80%左右是由根癌農(nóng)bacillus介導的，大約20%是由發(fā)根農(nóng)bacillus介導的。這里主要介紹根癌農(nóng)桿1菌介導的轉化。

　　根癌農(nóng)bacillusTi質粒上有一段轉移DNA（T-DNA）和Vir區(qū)，在農(nóng)bacillus侵染植物時，這段T-DNA可以插入到植物基因組中，使其攜帶的基因在植物中得以表達。Vir區(qū)共24個基因，它們表達的蛋白與T-DNA的加工和轉移有關。

　　農(nóng)桿1菌轉化法在植物遺傳轉化中的應用：過去認為受農(nóng)bacillus宿主范圍限制，農(nóng)bacillus介導的遺傳轉化只限于雙子葉植物。1987年Grimsly首先將玉米條斑病毒的cDNA克1隆至質粒上，用農(nóng)bacillus侵染的方法將玉米條斑病毒的cDNA導入玉米，使植株表現(xiàn)了系統(tǒng)感1染癥狀。這個報道有力地證明了農(nóng)bacillus能夠侵染玉米這種單子葉植物。隨著載體系統(tǒng)和轉化方法的改進，農(nóng)bacillus介導的遺傳轉化不再局限于雙子葉植物，在一些單子葉植物如水稻、玉米和小麥等重要的農(nóng)作物上也相繼獲得成功。

　　進入20世紀90年代后，農(nóng)桿1菌轉化法在水稻、玉米等重要的農(nóng)作物上取得突破性進展。首先是1991年Gould和Shen等利用農(nóng)bacillus轉化玉米莖尖分生組織獲得轉基因植株。1998年Lupotto也實現(xiàn)了農(nóng)bacillus轉化玉米的成功，Southern雜交結果顯示外源基因能夠穩(wěn)定遺傳到下一代。

腺病毒是無胞膜的線性雙鏈DNA病毒，目前腺病毒科分為5個屬，有多種型別的腺病毒已經(jīng)被開發(fā)為基因轉移載體，在基礎科研、基因cure和載體疫1苗領域得到廣泛應用。

腺病毒的基因組長約26-46kb，這使得腺病毒載體的構建與常見質粒載體(一般長度小于10kb)不同。太長的基因組使得在腺病毒載體上富集一個多克1隆位點非常困難。針對重組腺病毒的構建，開發(fā)了多種方法。

目前已有的腺病毒載體系統(tǒng)均存在缺陷，有些構建步驟繁瑣，耗時較長，有些在重組病毒中引入了不必要的外源序列，有些不能用于重組腺病毒的反向遺傳改造。近年來，新的生物特性不同的腺病毒不斷被發(fā)現(xiàn)，因此，本領域對構建過程更加快捷簡便的、人工改造更加方便靈活的腺病毒載體系統(tǒng)和重組病毒構建方法存在需求。

腺病毒防治原則

腺病毒的甲醛滅活疫1苗已被用于某些人群的預防，而且將來有被用人二倍體細胞培養(yǎng)的減毒活疫1苗所替代的可能。但因腺病毒對動物具有致癌作用，人們對全病毒疫1苗的作用與安全性存有疑慮。此外加強游泳池和浴池水的消毒，可使水傳播性結膜1炎爆發(fā)的危險性降至zui小，在作眼的檢查時應嚴格無菌操作，對所用設備充分滅菌，也可控制流行性結膜1炎的發(fā)生。對腺病毒感1染的cure仍無有效medicine。