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PCR實驗室條件:
1、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實驗室;實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn),目前已得到廣泛應(yīng)用。本文試就其定量原理、方法及參照問題作一介紹
2、檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實驗室設(shè)置要求;熒光定量PCR儀 實時熒光定量試劑 通用電腦 自動分析軟件,構(gòu)成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統(tǒng)。
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PCR實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
PCR試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
該實驗區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
對與氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。
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PCR實驗室的相關(guān)設(shè)置:要完成一組PCR實驗,通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析4個實驗過程。
這4個實驗過程的實驗用房應(yīng)相鄰布置,組成一個獨(dú)立的PCR實驗區(qū)。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗區(qū)包括:試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。
PCR實驗室整體平面布局
某醫(yī)院PCR實驗室平面布局,整個區(qū)域有一個公用走廊,每個獨(dú)立實驗區(qū)設(shè)有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制,使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染,并且降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。