PCR的創(chuàng)建

Khorana (1971)等zui早提出核酸體外擴增的設(shè)想：“經(jīng)DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，并不斷重復(fù)該過程便可合成tRNA基因?！钡捎诋?dāng)時基因序列分析方法尚未成熟，熱穩(wěn)定DNA聚合酶尚未報道以及引物合成的困難，這種想法似乎沒有實際意義。加上分子克1隆技術(shù)的出現(xiàn)提供了一種克1隆和擴增基因的途徑，所以Khorana的設(shè)想被人們遺忘了。

1983年4月的一個星期五晚上，他開車去鄉(xiāng)下別墅的路上,猛然閃現(xiàn)出“多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”的想法。

1983年12月，Mullis用同位素標(biāo)記法看到了10個循環(huán)后的49 bp長度的第yi個PCR片段；

1985年，Kary Mullis在Cetus公司工作期間，發(fā)明了PCR。Mullis要合成DNA引物來進(jìn)行測序工作，卻常為沒有足夠多的模板DNA而煩惱。

1985年10月25日申請了PCR的專1利，

1987年7月28日批準(zhǔn)（專1利號4,683,202 ），Mullis是第yi個發(fā)明人；

1985年12月20日在Science雜志上發(fā)表了第yi篇PCR的學(xué)術(shù)論1文，Mullis是共同作者；

1986年5月，Mullis在冷泉港實驗室做專題報告，全世界從此開始學(xué)習(xí)PCR的方法。

等位基因特異性PCR(Allele- specificPCR. ASPCR技術(shù)

ASPCR依賴于引物3”-端的一個堿基錯配,不僅減少多聚酶的延伸效率,而且降低引物-模板復(fù)合物的熱穩(wěn)定性。這樣有點突變的模板進(jìn)行PCR擴增后檢測不到擴增產(chǎn)物.可用于檢測基因點突變。

單鏈構(gòu)型多態(tài)性PCR(single- strandconformational polymorphism PCR, SSCPPCR)技術(shù)

SSCP- PCR是根據(jù)形成不同構(gòu)象的等長DNA單鏈在中性聚丙1烯酰胺凝膠中的電泳遷移率變化來檢測基因變異。在不含變性劑的中性聚丙1烯酰胺凝膠中,單鏈DNA遷移率除與DNA長度有關(guān)外,更主要取決于DNA單鏈所形成的空間構(gòu)象。相同長度的單鏈DNA因其順序不同或單個堿基差異所形成的構(gòu)象就會不同，PCR產(chǎn)物經(jīng)變性后進(jìn)行單鏈DNA凝膠電泳時，每條單鏈處于一定的位置.靶DNA中若發(fā)生堿基缺失、插入或單個堿基置換時.就會出現(xiàn)泳動變位。從而提示該片段有基因變異存在。

分子克1隆

PCR被廣泛應(yīng)用于目標(biāo)DNA部分片段的克1隆，該技術(shù)被稱為 PCR 克1隆。在直接PCR克1隆中，DNA（如，gDNA、cDNA、質(zhì)粒DNA）的目標(biāo)區(qū)域被擴增并插入到特殊設(shè)計的兼容載體中。

除了制備插入片段，PCR也是一種在在克1隆后篩選克1隆是否攜帶目標(biāo)插入片段的有效方法。引物經(jīng)過設(shè)計，可以用于確定載體中插入片段是否存在和插入方向。