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反相分離柱C18的適用范圍
C18反相分離柱廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取,藥1物合成研究與開發(fā),生物制藥等領(lǐng)域。若樣品極性偏大, Rf值非常接近,則不能分離正相模式;終產(chǎn)物要求純度98%以上,采用正相模式達(dá)不到;樣品在正相條件下存在溶解問題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術(shù)的成熟和良好的分離能力,C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。
反相式C18反相分離柱的主要參數(shù)
分離柱C18有多種參數(shù),大致可分為四個方面:相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內(nèi)徑、柱長)和隱藏參數(shù)(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個大家容易忽略的
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反向作用機(jī)制:
反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)與目標(biāo)化合物碳?xì)滏I之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質(zhì)中提取分離出非極性和中等極性的目標(biāo)化合物。
對利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標(biāo)化合物,可用氯1仿、環(huán)己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當(dāng)溶劑的洗脫強(qiáng)度足夠大,可以使目標(biāo)化合物與吸附劑非極性基團(tuán)間的范德華力不受影響時,使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強(qiáng)的甲1醇,對許多化合物而言,也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候,單種溶劑無法完全洗脫疏水性的目標(biāo)化合物,可以考慮使用二氯甲1烷:乙1酸乙1酯(1:1,體積比)。
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原則:用 SEP柱不同填料中測定的化合物與背景雜質(zhì)的分配系數(shù)差異,匹配相應(yīng)的洗脫溶劑,將化合物與雜質(zhì)分離。
分類:反相萃取柱(從極性基質(zhì)中提取非極性樣品),正相萃取柱(從極性基質(zhì)中提取極性樣品),離子交換萃取柱(從電荷樣品中提取)。
應(yīng)用:它主要用于反相萃取,適用于非極性到中極性化合物,如素、、酞嗪、、、染料、芳香香油、脂溶性維生素、殺真菌劑、除草劑、環(huán)境、 PAH和 PCB殘留物、食品添加劑、碳水化合物、對羥基甲取代脂、酚類、酚類、鄰苯二甲酸酯、類固醇、表活化劑、、水溶性維生素等。
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Phenyl苯柱:與C18和C8相比,吸附較弱,適用于非極性化合物到中極性化合物,特別是苯系化合物。Cyano-cn氰基柱
反相萃取:適于中極性化合物,正相萃取:適于,物質(zhì),染料,除草劑,,類固醇;弱陽離子交換萃取:適于碳水化合物,陽離子化合物…
氨基阿米諾-NH2:正相抽提:適用于極性化合物,弱陰離子交換抽提:適用于碳水化合物,弱陰離子及有機(jī)酸化合物。
AluminaA型酸性氧化鋁柱,
當(dāng)選用柱狀規(guī)格時,必須考慮到目標(biāo)化合物和在萃取條件下可能吸附的總干擾物,而不僅僅是目標(biāo)化合物。另外,即使目標(biāo)化合物未超過柱容量, SPE柱在保留目標(biāo)化合物的同時也保留了部分干擾物,由于兩者的總量已超過柱容量,其結(jié)果必然是部分目標(biāo)化合物無法保留在 SPE柱中。
預(yù)處理溶劑和參數(shù)的選?。?
確定預(yù)處理 SPE柱所用溶劑及其用量和流速,并進(jìn)行平衡。在反相或離子交換柱中,通常以或極性為預(yù)處理溶液,以水或緩沖溶液為平衡溶液。
樣本過柱流速度的選擇:下一步是確定樣品通過 SPE柱流動速度。過柱流速與 SPE試樣中填充物的粒徑分布、填充物的填充密度、目標(biāo)化合物與試樣基質(zhì)的結(jié)合程度、試樣的粘度等因素有關(guān)。