Arf樣蛋白1（Arl1）是GTpases的Ras超家族中的調(diào)控性GTPases Arf家族的成員，并且在整個(gè)真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1對(duì)果蠅和秀麗隱桿線蟲的早期胚胎發(fā)育至關(guān)重要。 Arl1在主要序列，細(xì)胞定位和功能（膜運(yùn)輸調(diào)節(jié)）上與Arf1-6較相似，甚至共享幾個(gè)共同的結(jié)合伴侶。 除了其在高爾基體/反式高爾基體網(wǎng)絡(luò)中的膜運(yùn)輸功能中，還有報(bào)道表明Arl1在酵母中的離子穩(wěn)態(tài)中可能發(fā)揮作用。

Arf6激l活測(cè)定。 經(jīng)GDP（lane1）或GTPγS（lane 2）處理后，純化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性Arf6單克l隆抗l體進(jìn)行免l疫沉淀。

檢測(cè)原理

    武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司的Cdc42活性檢測(cè)試劑盒主要是利用識(shí)別蛋白特異形態(tài)的Cdc42-GTP單克l隆抗l體特異性的去檢測(cè)細(xì)胞提取物或者體外的（樣品需要進(jìn)行GTPγS活化處理）活性Cdc42-GTP的水平。簡(jiǎn)言之，特異性識(shí)別Cdc42活化構(gòu)象的鼠單克l隆抗l體可以特異性結(jié)合細(xì)胞裂解液中的Cdc42-GTP活性蛋白，然后利用protein A/G將抗原抗l體的結(jié)合物吸附下來，再利用特異性識(shí)別Cdc42活化構(gòu)象的兔多克l隆抗l體進(jìn)行免l疫印跡分析進(jìn)行檢測(cè)。

試劑制備

1X Assay/Lysis Buffer：實(shí)驗(yàn)前用去離子水將5X的Assay/Lysis緩沖液稀釋成1X的緩沖液，并在使用前加入蛋白酶抑制l劑如1 mM PMSF, 10 μg/mL leupeptin（亮肽素），或 10 μg/mL aprotinin（抑肽酶）。

樣品處理

貼壁細(xì)胞

1. 培養(yǎng)細(xì)胞密度達(dá)到大約80%-90%之間（直徑10 cm培養(yǎng)皿，~107個(gè)細(xì)胞），并用活性劑或抑制l劑進(jìn)行處理。

2. 吸去培養(yǎng)基并用冰冷的PBS洗滌兩次。

3. 向細(xì)胞中加入1X Assay/Lysis緩沖液（每個(gè)直徑10cm的組織培養(yǎng)皿中加入0.5-1mL）。

4. 將培養(yǎng)皿放置于冰上處理10-20分鐘。

5. 用細(xì)胞刮棒把細(xì)胞從培養(yǎng)皿下分離下來。

6. 將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)入合適的管中并放置于冰上。

7. 如果核發(fā)生裂解，細(xì)胞裂解物可能會(huì)變得非常的粘稠并且難以吸取。當(dāng)這種情況出現(xiàn)時(shí)，將細(xì)胞裂解物用27?的注射l器針頭來回吸取3-4次，以破壞基因組DNA，從而避免上述情況的出現(xiàn)。

8. 4°C 12000 g, 離心10 min。

9. 收集上清（~1-2 mg總蛋白）并放置于冰上使用。如果樣品不立即使用，請(qǐng)將處理后的樣品存放于-70°C條件下。

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國生命科學(xué)試劑供應(yīng)商美國NewEastBio在中國的子公司。公司位于武漢東湖高新技術(shù)開發(fā)區(qū)光谷生物城.美國NewEastBio專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等，與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫(yī)院等客戶建立了長(zhǎng)期穩(wěn)定的合作關(guān)系，產(chǎn)品銷往全球。

在G蛋白的四個(gè)亞家族中，G12/13亞家族的功能尚不清楚。在這個(gè)家族，有兩個(gè)成員，G12和G13，它們普遍表達(dá)。Gα12基因敲除小鼠看上去很正常。Gα13基因敲除小鼠表現(xiàn)出胚胎致死性（~E9.5）。Gα13-/-老鼠胚胎的血管系統(tǒng)有缺陷。G13對(duì)受體酪氨酸激酶的誘導(dǎo)也是必不可少的成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。