紐斯特生物技術有限公司推出的Cdc42活性檢測試劑盒主要是依據單克l隆抗l體能夠特異性的識別Cdc42-GTP結合蛋白，而不識別Cdc42-GDP結合蛋白，進而簡單并且快速的進行Cdc42的活性檢測。同時試劑盒中的Cdc42-GTP單克l隆抗l體也可以進行免l疫組化實驗中細胞和組織中Cdc42的活性監(jiān)測。每套試劑盒可以進行20次檢測。

檢測原理

    武漢紐斯特生物技術有限公司的Cdc42活性檢測試劑盒主要是利用識別蛋白特異形態(tài)的Cdc42-GTP單克l隆抗l體特異性的去檢測細胞提取物或者體外的（樣品需要進行GTPγS活化處理）活性Cdc42-GTP的水平。簡言之，特異性識別Cdc42活化構象的鼠單克l隆抗l體可以特異性結合細胞裂解液中的Cdc42-GTP活性蛋白，然后利用protein A/G將抗原抗l體的結合物吸附下來，再利用特異性識別Cdc42活化構象的兔多克l隆抗l體進行免l疫印跡分析進行檢測。

電泳和轉膜

1. 取15ul樣品/孔上樣17%配體膠。

2. 按照制造商的說明進行SDS-PAGE。

3. 按照制造商的說明將凝膠蛋白轉到PVDF或硝化纖l維素膜。

免l疫印跡反應和檢測（所有步驟都是在室溫下進行，并不斷攪拌）

1. 將PVDF膜浸入100%甲l醇15s，然后在室溫放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纖l維素膜，此步省略。

2. 封閉：用TBST緩沖液配制5%的脫脂牛奶或者3%BSA在室溫下孵育1H進行封閉，并需要恒定振蕩。

3. 孵育一抗：用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA稀釋特異性識別Cdc42活性構象的兔多克l隆抗l體（稀釋比例為1:50-1:1000，主要根據樣品中含有的Cdc42蛋白的量），室溫下孵育1-2小時，或者4°C條件下過夜孵育。

4. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。

5. 孵育二抗：（例如羊抗兔IgG-HRP），用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA按1:1000稀釋比例稀釋后使用，室溫下孵育1小時并恒定振蕩。

6. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。

7. 使用實驗者所選擇的檢測方法進行顯色如ECL顯色法。

GTPases的Rab家族調節(jié)真核水泡膜運輸。 Rab35與兩個血漿

膜和內體定位，并涉及到包括T細胞受體回收，卵母細胞卵黃蛋白回收和胞質分裂在內的各種過程。 Rab35調節(jié)神經元樣細胞中的神經突生長，并可以誘導突起。

當前沒有直接測定法來測量Rab35 GTPases的活化。

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒基于特定于配置的單克l隆

特異性識別Rab35 GTP而不識別Rab Rab35 GDP的抗l體。鑒于...的高度親和力

抗原的單克l隆抗l體，可以在短時間內進行激l活測定。這個

分析提供了可靠的結果，并具有一致的可重復性。

這些抗Rab35 GTP單克l隆抗l體也可以用于監(jiān)測大鼠Rab35的激l活。

1細胞和組織中的免l疫組織化學。

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒提供了一種簡單快速的方法來監(jiān)測

Rab35的激l活。每個試劑盒均提供足夠的量以執(zhí)行20個測定。