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1.刺激的和非刺激的細(xì)胞裂解液
2.蛋白酶抑l制劑
3. 4°C管搖桿或搖床
4. 0.5 M EDTA,pH8.0
5. 1 M氯化鎂
6. 2倍還原SDS-PAGE樣品緩沖液
7.電泳和免l疫印跡系統(tǒng)
8.免l疫印跡洗滌緩沖液,例如TBST(10 mM Tris-HCl,pH 7.4,0.15 M NaCl,0.05%
吐溫20)
9.免l疫印跡封閉緩沖液(TBST包含5%脫脂奶粉或3%BSA)
10. PVDF或硝l酸纖維素膜
11.二抗
12. ECL檢測試劑
儲存條件
試劑盒的成分在試劑盒的有效期限內(nèi)必須存放于4°C條件下保存。
試劑(試劑盒內(nèi)不提供,由實(shí)驗(yàn)者自行配置)
1. 刺激和未刺激的細(xì)胞裂解物;
2. 蛋白酶抑制l劑;
3. 4 °C 搖桿或者搖床;
4. 0.5 M EDTA (pH 8.0);
5. 1 M MgCl2;
6. 2X reducing SDS-PAGE sample buffer;
7. 電泳和免l疫印跡相關(guān)試劑;
8. 免l疫印跡緩沖液TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05%
Tween-20);
9. 免l疫印跡封閉緩沖液 (TBST containing 5% 脫脂奶粉 or 3% BSA);
10. PVDF或硝l酸纖維素膜;
11. 二抗;
12. ECL 檢測試劑;
Gα13活化試驗(yàn)。MEF細(xì)胞分別用LPA(第2道)或不加LPA(1道)處理。細(xì)胞裂解物用抗活性Gα13單克l隆抗l體(Cat)孵育。#26902)(頂面板)。這個用抗Gα13兔多克l隆抗l體(Cat)免l疫印跡法檢測沉淀活性Gα13#21005年)。底部的面板顯示了用抗Gα13的細(xì)胞裂解物的Western blot(5%在頂部面板中使用的)。