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Arl3(類似Arf的3)是一種ADP-核糖基化因子(Arf)家族蛋白,在N端延伸方面不同于大多數Arf家族成員。 Arl3的核苷酸交換是快速的,并且與脂質和去污劑無關。 與GDT / GTP結合后,Arl3與一系列效應蛋白相互作用,并調節(jié)這些效應蛋白的活性,例如人類視網l膜基因4(HRG4),cGMP磷酸二酯酶的δ亞基(PDEδ)和Arl2的結合物(BART)。 Arl3還以可調節(jié)的方式結合微管,以通過與色素性視網l膜炎2(RP2)相互作用來改變胞質分裂的特定方面。 有人提出,RP2與Arl3協同作用,將光感受器中的細胞膜和細胞骨架連接為細胞的一部分
9.收集上清液并在冰上存儲樣品(約1-2 mg總蛋白)以進行中間使用,或將其冷凍并保存在-70°C下以備將來使用。
小G蛋白是從屬于細胞調節(jié)因子中的一個超家族。Rho家族是小G蛋白中的一個亞家族,它在細胞運動、細胞分裂以及基因轉錄中發(fā)揮主要作用。而本試劑盒中的Cdc42就屬于Rho亞家族中的一種, Cdc42參與生理活動過程中其分子結構會呈現出2種相互轉換的形式:與GTP結合的激l活狀態(tài)和與GDP結合的非活性狀態(tài)。
目前Cdc42蛋白活性的檢測主要是依據小GTP酶Cdc42可以與p21活化激酶(PAK)的p21結合區(qū)域(PBD)結合,使PAK活化從而發(fā)揮生物學功能,進而間接的進行Cdc42活性l功能的監(jiān)測。然而此方法在檢測過程中存在著一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度過快以及Cdc42-GTP結合蛋白與p21結合區(qū)域之間較低的親和力,導致這種檢測方法的重復性較差。
分析原理
基于構型特異性抗Gα13-GTP的NewEast生物科學Gα13活化檢測試劑盒從細胞提取物或體外檢測活性Gα13-GTP水平的單克l隆抗l體GTPγS負載Gα13活化試驗。簡單地說,抗活性Gα13小鼠單克l隆抗l體用含有Gα13-GTP的細胞裂解液培養(yǎng)。結合的活性Gα13將被蛋白質A/G瓊脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l體免l疫印跡法檢測沉淀的活性Gα13。