液相色譜的分離過程

同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質在兩相間分配系數、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設樣品中含有3個組分，A、B和C，隨流動相一起進入色譜柱，開始在固定相和流動相之間進行分配。分配系數小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數大的組分C在固定相上滯留時間長，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數介于A，C之間，第二個流出色譜柱。若一個含有多個組分的混合物進入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數的不同先后流出色譜柱，達到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學平衡問題，也是分離的首要條件。

其次，當不同組分在色譜柱中運動時，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴散系數、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關。所以分離效果則是熱力學與動力學兩方面的綜合效益。

　液相色譜基本功能為

1、六種定量計算方法:歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內標法、外標法及指數計算法.　　

2、校準運行:能夠實現(xiàn)使用多種不同濃度的標準試樣進行校準,建立樣品濃度──面積校正曲線.　　

3、靈活的峰識別和處理能力:可以通過設置峰處理參數和時間程序識別色譜峰的處理,也可以用人工方式進行處理.　　

4、色譜圖形、設定的定量計算方式、峰處理參數及峰鑒定表等可以保存到用戶自命名的文件中.

色譜柱的技術都有哪些？比如，封尾等，這些技術在應用時都體現(xiàn)在哪里？

色譜柱技術包括填料技術，封尾技術和裝柱技術等，填料技術自不待言，填料的差異對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響，色譜填料的鍵合相密度的不同也會影響到填料表面硅羥基外露的多少，進而影響填料的選擇性。封尾技術中用到的封尾試劑的差異也會對色譜柱的性質產生很大的影響，如體現(xiàn)在色譜填料的pH耐受范圍，水相耐受范圍，極性強弱等。裝柱技術也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術，需要經驗積累。

液相色譜儀的構造

液相色譜系統(tǒng)主要由流動相儲液瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。液相色譜的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)，進樣系統(tǒng)要求進樣便利、切換嚴密。同時，由于液體流動相黏度遠遠高于氣體，為了減低柱壓，液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。