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武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司長期致力于建立并完善多項基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺?,F(xiàn)憑借自身技術(shù)特色,依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢,面向全國提供的生物技術(shù)服務(wù)。
FISH:采用了已知序列的、特異性的單鏈核酸作為探針,標記了生物素或熒光素,在一定的溫度和離子濃度下通過堿基互補配對法則,使得DNA-DNA原位雜交,采用熒光法顯示,將DNA在細胞爬片、組織切片(石蠟切片or冰凍切片)的原始位置上標記出來的一種技術(shù)。對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進行篩選時,可采用該方法。
原位雜交在前。
(1)常規(guī)脫蠟入水。
(2)37℃蛋白酶K消化20min,37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。
(3)滴加探針,加蓋玻片,避光、濕盒、37℃過夜孵育。
(4)如果試劑盒允許的話,將試劑盒中洗脫液水浴加溫至37℃震蕩洗脫多余的探針。
(5)加堿性磷酸酶標記的抗1體,37℃孵育半小時,洗去抗1體后顯色。
免1疫組化在后。
(1)將顯色后確認為陽性的切片充分漂洗。
(2)在PH為6.0的枸櫞酸鈉溶液中,微波至96℃左右,作用10min。
(3)滴加一抗,37℃濕盒孵育2h。
(4)充分漂洗切片,滴加二抗,室溫下孵育40-50min。
(5)DAB顯色后,采用PBS中止顯色反應(yīng)。
(6)不要復(fù)染核,不然就蓋住原位雜交信號了。