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表面活性劑是指加入少量能使其溶液體系的界面狀態(tài)發(fā)生明顯變化的物質(zhì),具有固定的親水親油基團(tuán),在溶液的表面能定向排列。表面活性劑的應(yīng)用可分為民用和工業(yè)應(yīng)用。民用表面活性劑中有2/3用于個人保護(hù)用品,工業(yè)用表面活性劑是民用表面活性劑以外用于各工業(yè)領(lǐng)域的表面活性劑總和。表面活性劑的分子結(jié)構(gòu)具有兩親性:一端為親水基團(tuán),另一端為疏水基團(tuán);親水基團(tuán)常為極性基團(tuán),如羧酸、磺酸、硫酸、氨基或胺基及其鹽,羥基、酰胺基、醚鍵等也可作為極性親水基團(tuán);而疏水基團(tuán)常為非極性烴鏈,如8個碳原子以上烴鏈。Tris含有三個羥基和一個氨基,均為良好的親水基團(tuán),因此Tris也是合成表面活性劑的重要中間體。
三羥,英文名Tromethamine或Trometamol,簡稱THAM,它是一種應(yīng)用非常廣泛的有機試劑,可用于制作、有機合成、生物緩沖劑等。其中在生化實驗中,許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實驗都需要用THAM作為生物緩沖劑。THAM可由與或在催化劑下高壓反應(yīng),然后經(jīng)氮氣、氫氣轉(zhuǎn)換制得。THAM極易溶于水,本身顯堿性,作為緩沖劑時通常需要配合酸一起使用,比如THAM-HCl緩沖液就是比較常用的,除此之外還有許多其他的緩沖液體系。
蛋白制備及純化過程中緩沖液的選擇非常重要,合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。
當(dāng)我們純化蛋白時,的就是要保持蛋白在純化過程中不能失活,或者是盡量降低純化過程對蛋白活性帶來的損失。這就意味著蛋白在整個純化過程中要始終保持可溶性和活性。
因此設(shè)計一個防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了,尤其會凸顯在實驗結(jié)果上。在設(shè)計緩沖buffer時應(yīng)考慮以下幾個因素:pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個因素都要根據(jù)你的目的蛋白進(jìn)行優(yōu)化,并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標(biāo)準(zhǔn)。
許多緩沖液中含有NaCl,以幫助保持蛋白的可溶性和模擬生理條件。一般常用150 mM的NaCl。
在不同的蛋白純化步驟中,可能需要改變鹽離子的濃度。例如,如果是通過離子交換層析進(jìn)行蛋白純化,一開始需要降低鹽離子的濃度(5~25mM)避免高離子強度和蛋白競爭和填料結(jié)合,這樣可防止蛋白從離子交換柱中流穿,從而使柱子能夠結(jié)合目的蛋白,洗脫除去雜蛋白。