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發(fā)布時間:2020-12-17 14:48  






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如果檢測到熒光信號超過域值被認(rèn)為是真正的信號,它可用于定義樣本的域值循環(huán)數(shù)(Ct)。Ct值的含義是:每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,因此只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。廣州勱博--病毒核酸提取系統(tǒng)銷售一個豬場對進(jìn)場人員的衣物進(jìn)行熏蒸消毒,專門制作了一個消毒柜,但由于開始設(shè)計不理想,消毒柜太大,無法進(jìn)入屋內(nèi),就放在了舍外。

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擴(kuò)增序列特異性檢測方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產(chǎn)物,它又可分為直接法和間接法。間接的方法就是利用水解探針的策略。目前在real-time Q-PCR中廣泛使用的TaqMan系統(tǒng)就是運(yùn)用了這個原理。PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán),此時5′端熒光基團(tuán)吸收能量后將能量轉(zhuǎn)移給臨近的3′端熒光淬滅基團(tuán)(發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,F(xiàn)RET),因此探針完整時,檢測不到該探針5′端熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光。廣州勱博--生豬屠宰場病毒核酸提取系統(tǒng)經(jīng)銷根據(jù)動物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫(yī)實(shí)施屠宰檢疫。


廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。廣州勱博--養(yǎng)殖場核酸提取純化傳統(tǒng)的PCR定量是應(yīng)用終點(diǎn)PCR來對樣品中的模板量進(jìn)行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的最終擴(kuò)增產(chǎn)物。

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FQ-PCR在醫(yī)學(xué)栓測中有價值的應(yīng)用領(lǐng)城就是對感i染性疾病的診斷,只要有限的核酸序列清楚,運(yùn)用FQ-PCR技術(shù),檢測任何病原體。目前,對一些培養(yǎng)周期長或缺乏穩(wěn)定可靠的檢測手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測,為臨床診斷提供依據(jù)FQ-PCR對病原體的檢測克服了免i疫學(xué)檢測的“窗口期“問題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態(tài)。FQ-PCR技術(shù)可以應(yīng)用于腫癟的研究及診斷。專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測模塊,用于監(jiān)測擴(kuò)增時的熒光,檢測到的熒光信號反映了每個循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。

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實(shí)時熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進(jìn)行模板的擴(kuò)增。但在實(shí)際的PCR反應(yīng)過程中,隨著反應(yīng)的進(jìn)行由于體系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰減)使得靶序列并非按指數(shù)方式擴(kuò)增,而是按線性的方式增長進(jìn)入平臺期。因此在起始模板量與終點(diǎn)的熒光信號強(qiáng)度間沒有可靠的相關(guān)性。如采用常規(guī)的終點(diǎn)檢測法(利用EB染色來判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴(kuò)增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點(diǎn)熒光信號強(qiáng)度。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。



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傳統(tǒng)的PCR定量是應(yīng)用終點(diǎn)PCR來對樣品中的模板量進(jìn)行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物。但在PCR反應(yīng)中,由于模板、試劑、焦磷酸鹽分子的聚集等因素影響聚合酶反應(yīng),終導(dǎo)致PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式進(jìn)行而進(jìn)入“平臺期”,而且一些反應(yīng)的終產(chǎn)物比另一些要多,因此終點(diǎn)PCR反應(yīng)方法定量并不準(zhǔn)確。此外,終點(diǎn)PCR還容易交叉污染,產(chǎn)生假陽性。溫度上的高分辨率使得運(yùn)用定量PCR儀進(jìn)行高分辨率熔解曲線(HRM)分析基因型成為可能。

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核酸提取儀原理是,經(jīng)裂解液裂解后,細(xì)胞核中會釋放出核酸分子,會被吸附在磁珠表面,而蛋白質(zhì)等物質(zhì)不會被吸附,結(jié)合了核酸的磁珠被磁性物質(zhì)固定在管壁上轉(zhuǎn)移到洗脫管中,經(jīng)過反復(fù)洗脫,后我們可以得到純凈的DNA。根據(jù)其使用范圍可以分為兩類,一種是大型核酸提取儀,另一種是小型核酸提取儀;(2)因?yàn)闊晒馑胤N類以及檢測光源的局限性,從而相對地限制了real-timeQ-PCR的復(fù)合式(multiplex)檢測的應(yīng)用能力。主要是利用磁珠純化核酸及蛋白質(zhì)從而達(dá)到提取核酸的目的,在細(xì)胞、動植物組織等研究方面,一個樣品用一個探針,有效防止樣品之間的交叉污染。


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非洲(African Swine fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine fever virus,ASFV)感i染家豬和各種(非洲、歐洲等)引起一種急性、出i血性、烈性傳i染病。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,該病也是我范的一類動物疫情。其特征是發(fā)病過程短,急性和急性i感i染死i亡率高達(dá)100%,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達(dá)40~42℃),心跳加快,呼吸困難,部分咳嗽,眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,皮膚發(fā)紺,淋巴i結(jié)、、胃腸粘膜明顯出血,非洲臨床癥狀與癥狀相似,只能依靠實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測確診。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。

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非洲是一種傳i染性強(qiáng),危害嚴(yán)重的豬感i染病毒性疾病。非洲病毒(ASFV)通過直接或間接接觸傳播,在豬群眾傳播速度極快。而且,該病毒在未經(jīng)烹飪的生豬相關(guān)制品中存活時間很長,這一特點(diǎn)使得非洲容易向未感i染區(qū)域傳播。由于非洲可以感i染,而軟蜱通過叮咬成為非洲主要傳播途徑之一,這也給非洲的凈化帶來難度。非洲的感i染致死率極高,接近100%,并且目前沒有有效的疫i苗和治i療手段。PCR技術(shù)在傳i染病診斷上具有廣泛的應(yīng)用,該技術(shù)靈敏度高,特異性強(qiáng),能夠在豬、豬產(chǎn)品及環(huán)境中病毒的“蹤跡”進(jìn)行有效的監(jiān)控,是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指i定的非洲首i選診斷技術(shù)。廣州勱博--屠宰場熒光定量PCR磁珠法核酸提取,具有傳統(tǒng)DNA提取方法無法比擬的優(yōu)勢,主要體現(xiàn)在:①能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、大批量操作,符合生物學(xué)高通量的操作要求,使得傳i染性疾病爆發(fā)時能夠進(jìn)行快速及時的應(yīng)對,這一特點(diǎn)使得傳統(tǒng)方法望塵莫及。


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