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以下列出了一些色譜柱的清洗溶劑和順序,作為參考:以正已烷(或庚烷)、和的硅膠柱依次沖洗,然后按相反的順序沖洗,所有的溶劑必須嚴格脫水??梢郧逑吹魵埩舻膹姌O性雜質(zhì),并對硅膠表面進行活化。反相柱用水、、、(或)依次沖洗,然后按反序沖洗。若下一步分析所用的流動相不含緩沖液,就可以忽略一步用水沖洗。可洗去殘留的非極性雜質(zhì),多次在()沖洗時多次注射100-200μ l四氫,有助于去除強疏水性的雜質(zhì)。四氫與或混合溶液可去除類脂。有時候還要注射幾次二甲砜。用0.1%的、、三梯度洗脫可去除蛋白質(zhì)污染。用稀酸緩沖洗陽離子交換柱,用稀堿緩沖液沖洗,把交換性能很強的鹽去掉,再用水、、(除去固定相表面吸附的有機物)、、水,依次沖洗。
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保存色譜柱時,柱中應(yīng)充滿或,柱連接處應(yīng)緊固,防止溶劑揮發(fā)干燥。請勿將緩沖液留在柱內(nèi)待一夜或更久。8、在使用色譜柱時,如果壓力升高,有一種可能是燒結(jié)過的濾片被堵塞,此時應(yīng)更換濾片或取出清洗;還有一種可能是大分子進入柱內(nèi),使柱頭受到污染;如果柱效降低或色譜峰變形,可能會出現(xiàn)柱頭塌陷,體積增大。當(dāng)出現(xiàn)后兩種情況時,小心將柱頭接頭擰開,用潔凈的小鋼將柱頭填料取出1~2 mm的高度(注意將污染的填料取凈)再將柱內(nèi)填料整平。接著將其填充到色譜柱中,用合適的溶劑潤濕固定相(與柱相同),壓平,然后擰緊柱接頭。這種處理后柱的效能有所提高,但難以恢復(fù)到新柱水平。柱失效一般為柱端,在分析柱前安裝與分析柱相同固定相的短柱(5-30毫米),可起到保護、延長柱壽命的作用。使用保護柱會失去一些柱效,這是值得的。
柱溫箱,在柱溫箱中有色譜柱,實際上分離是發(fā)生在色譜柱上,柱溫箱本身的保養(yǎng)和使用要點并不多說。小探認為,實際上柱溫箱是整個液相色譜系統(tǒng)中皮實的一個部件,只要保證接頭擰緊不漏氣,好像一萬年都看不出來它出了什么問題,要注意的是安捷倫的柱溫箱會有兩個控制溫區(qū),左邊寫著3 uL,右邊寫著6 uL,一般情況下,我們要用3 uL的柱溫箱,一般情況下,我們要使用3 uL的那個,以減小儀器的延遲和擴散。
探測器。探測器的種類很多,而且各有千秋,在此我們還是要找大家的紫外光(VWD)/二極管陣列(DAD)探測器。兩者均為紫外類檢測器,盡管光路設(shè)計不同,但基本原理是一致的。6.1探測系統(tǒng)中一個非常重要的部分是光源,俗稱燈,它是一種消耗品,就像家里的燈泡,用到一定程度就壞了。但家中的燈泡不能像家里的燈泡那樣點不亮?xí)r要更換,因為放在檢測器中的燈是需要發(fā)射能量的,一旦能量衰減到一定程度,就會出現(xiàn)基線噪聲變大、靈敏度降低等一系列問題。一般情況下,燈泡的壽命是2000 h,當(dāng)達到這一時,我們就特別注意燈泡的能量狀況,可以在儀器維護軟件中自帶的“燈能量測試”來判斷,測試結(jié)果將分別對低、高三個波長段的能量進行評估,一旦某一波長段的結(jié)果顯示失敗,就表示要換燈,通常個失敗的是低波長段。檢測器中的另一個重要部分是檢測器,也被稱為流通池。許多時候,大家關(guān)心的是檢測池是否被堵住,因為檢測池一般不耐壓,所以一旦堵住,很容易造成損壞。
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固相萃取柱
固相萃取柱(英文,簡稱 SPE column,或 Solid Phase extraction Cartridges,簡稱 SPE cartridges)是一種樣品前處理設(shè)備,從層析柱發(fā)展而來。適用于各類食品、農(nóng)畜產(chǎn)品、環(huán)境樣品及生物樣品中目標(biāo)化合物的預(yù)處理。許多(GB/T)以及工業(yè)分析標(biāo)準中都廣泛采用固相萃取技術(shù)。
固相萃取柱容量是指固相萃取柱填料的吸附能力。用硅膠作基質(zhì)的固相萃取柱,容量一般在1~5 mg/100 mg/100 mg/100 mg,或柱容為1%~5%。硅膠復(fù)合離子交換吸附劑的容量以 meq/g表示,即每克填料的容量為 X毫克當(dāng)量。這種填料的容量一般為0.5~1.5 meq/g。
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原則:
SPE技術(shù)以液-固相色譜理論為基礎(chǔ),對樣品進行選擇性吸附、選擇性洗脫等富集、分離、凈化,是一種包含液-固相物理萃取的過程,也可近似地視為一個簡單的色譜過程。SPE是利用選擇性吸附和選擇性洗脫的液相色譜分離原理。比較常用的方法是將所測物質(zhì)通過該吸附劑,保留所測物質(zhì),再選用合適的強度溶劑沖去雜質(zhì),然后用少量的溶劑迅速洗脫測物質(zhì),達到快速分離、凈化和濃縮的目的。還可選擇性吸附干擾雜質(zhì),而讓被測物質(zhì)流出;或同時吸附雜質(zhì)和被測物質(zhì),再用適當(dāng)?shù)娜軇┻x擇性洗脫被測物質(zhì)。