低溫生物菌種——制備

也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見圖），其中(1)～(4)為孢子制備過程。保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天(或較長時(shí)間)。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子，對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基。將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機(jī)鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶（5）液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

低溫生物菌種——保存方法介紹

脫水存法

①沙土保存法，能產(chǎn)孢子的細(xì)菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達(dá)5～7年。

② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑（一般用脫脂牛奶）相混合，放在安瓿管內(nèi)于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽結(jié)凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達(dá)5～10年之久。

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

低溫生物菌種的特點(diǎn)

活性菌量豐富

活性微生物數(shù)量是肥效得以充分發(fā)揮的基礎(chǔ)。任何一種微生物肥料都必須含有足夠多、有活性的特定微生物，這些特定微生物的數(shù)量和純度直接關(guān)系到微生物肥料的應(yīng)用效果，是衡量微生物肥料質(zhì)量的重要標(biāo)志。當(dāng)微生物肥料中特定微生物的數(shù)量降低到一定程度，或純度達(dá)不到要求時(shí)，肥效就會降低甚至失效。由于菌體的存活時(shí)間有限，因此微生物肥料的有效期也是衡量微生物肥料的重要因素。

生物菌種的優(yōu)點(diǎn)

1、根際環(huán)境保護(hù)屏障：菌群中的地衣芽孢菌等有益微生物施入土壤后，迅速繁殖成為優(yōu)勢菌群類，控制根際營養(yǎng)和資源，使重茬、根腐、立枯、流膠、灰霉等病原菌喪失生存空間和條件。使植物根系細(xì)胞的細(xì)胞壁增厚，纖維化、木質(zhì)化，并生成角質(zhì)雙硅層，形成阻止病原菌侵襲的堅(jiān)固屏障。

2、增強(qiáng)抗逆性：菌群中的地衣芽孢菌、巨大芽孢菌、側(cè)孢芽孢菌等有益微生物可增強(qiáng)土壤緩沖能力，保水保濕，增強(qiáng)作物抗旱、抗寒、抗?jié)衬芰?同時(shí)側(cè)孢芽孢菌還可強(qiáng)化葉片保護(hù)膜，抵抗病原菌侵染，抗病，抗蟲。