制備色譜能當分析色譜用嗎？

目前，高壓制備色譜系統(tǒng)哪家質(zhì)量好，很多客戶的要求都傾向于買一臺液相能同時解決制備和分析的所有問題，高壓制備色譜系統(tǒng)報價，那就相當OK。這樣的客戶大多是科研經(jīng)費緊張，好不容易批下來點錢，不想都花在后期純化和分析上，所以盡量二合一。

在我看來，分析液相和制備液相是通用的，只是精度的差別問題。比如，分析的液相一般流速在0.1～10mL/min，活塞的一個沖程大概是10μL，而普通的制備液相一般都是10～100mL的流速，因此活塞桿的尺寸也會變大，一個沖程差不多是100μL；流速的精度相對來說就差了很多。流速大了，管路也相應的粗了不少，以降低高流速帶來的背景壓力；但這樣的儀器用于分析的話，柱后的擴散現(xiàn)象相當?shù)膮柡?，即使在色譜柱上達到基線分離的兩個峰，由于柱后擴散的作用，到達檢測器的時候，差不多又會合到一起了；另外就是檢測器的差異，主要是檢測池的大小和狹縫的大小不同帶來的靈敏度的不同。制備儀器一般靈敏度是分析的1/20，以保證大量進樣后，不會超過量程太多而平頭，分不清到底分沒分開了。

倒是有個折中的辦法，就是買分析型的液相，然后接個半制備的色譜柱。半制備就是直徑一厘米的柱子，流速5mL以內(nèi)，因此這個分析液相能達到；進樣量大約是分析柱的10～20倍，檢測器可能會平頭，沒關(guān)系，換個波長，找個吸收較弱的波長當檢測波長就OK了，不是大量制備的話，我想基本可以滿足需要了。

制備色譜的填充

填料是工業(yè)制備色譜的血脈，高壓制備色譜系統(tǒng)費用，填料的選擇和利用是非常關(guān)鍵的，目前已有越來越多的產(chǎn)品應用到IPC中。填料的化學性質(zhì)和物理性質(zhì)決定了色譜的分離性能和動力學性能。應用于大規(guī)模工業(yè)化制備色譜中的填料具有如下特殊的要求?！　?/p>

1、機械強度高：填料需要承受很大的機械壓力，因為填料在IPC使用中，需要經(jīng)常裝卸，機械性能差的填料經(jīng)受不住反復填充，它們易破碎，產(chǎn)生細顆粒，降低柱滲透性，甚至堵塞濾片，造成流速分布不均勻，影響分離產(chǎn)物的純度，高壓制備色譜系統(tǒng)，在系統(tǒng)中產(chǎn)生極高的柱壓而無法繼續(xù)使用引。　　

2、負載量大：在IPC中，填料的負載量越大，則單位體質(zhì)量填料可處理的原料量就可增加，因而提高了產(chǎn)率。選擇合適孔徑及孔徑分布的填料是獲得高負載量的一個關(guān)鍵因素?！　?/p>

3、可大量供應，批間的重現(xiàn)性好：制備色譜工藝過程要擴大，必須有可靠的供貨源提供大量填料，否則無法實現(xiàn)工業(yè)化。填料各批量之間的化學和機械穩(wěn)定性、孔結(jié)構(gòu)及可重復的比表面積等必須具有高度的重現(xiàn)性，否則難以保證長期、持續(xù)、穩(wěn)定的分離與純化生產(chǎn)工藝?！　?/p>

4、合適的顆粒大小和窄的粒度分布范圍：細顆?？稍黾铀鍞?shù)及分辨率，但同時引起裝柱困難，需要更高的操作壓力。

如何用制備色譜柱制備低含量的雜質(zhì)？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質(zhì)，初步提純后用高分辨的LC-MS進行定性分析。如何設定色譜條件，如，流量、進樣量、樣品的濃度、切割點的設置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質(zhì)靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，否則流動相中的雜質(zhì)會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準確，檢測器的響應時間設到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2，大約為4mL/min。進樣量設到幾個mg應該基本沒有過載。進樣樣品濃度越高越好。假如進樣10mg，理論計算0.05%的雜質(zhì)大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

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