液相色譜儀的使用特點(diǎn)進(jìn)行分析概要

　液相色譜儀是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，在技術(shù)中，流動(dòng)相改為高壓輸送，色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜；同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器，可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)?！　∫合嗌V儀特點(diǎn)：　　

1、高壓：液相色譜法以液體為流動(dòng)相，液體流經(jīng)色譜柱，受到阻力較大，色譜分析方法，為了迅速地通過色譜柱，必須對(duì)載液施加高壓。一般可達(dá)150～350×105Pa；　　

2、高速：流動(dòng)相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達(dá)1～10ml/min。液相色譜法所需的分析時(shí)間較之經(jīng)典液相色譜法少得多，一般少于1h；　　

3、效率很高：近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高；　　

4、高靈敏度：液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測(cè)器，進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測(cè)器靈敏度可達(dá)10-11g。另外，色譜分析報(bào)價(jià)，用樣量小，一般幾個(gè)微升；　　

5、適應(yīng)范圍寬

液相色譜的五大系統(tǒng)

1、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分為手動(dòng)進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。

2、輸液系統(tǒng)輸液泵按輸出液恒定的因素分恒壓泵和恒流泵。對(duì)液相色譜分析來說，輸液泵的流量穩(wěn)定性更為重要，這是因?yàn)榱魉俚淖兓瘯?huì)引起溶質(zhì)的保留值的變化，而保留值是色譜定性的主要依據(jù)之一。因此，恒流泵的應(yīng)用更廣泛。

輸液泵按工作方式分為氣動(dòng)泵和機(jī)械泵兩大類。機(jī)械泵中又有螺旋傳動(dòng)注射泵、單活塞往復(fù)泵、雙活塞往復(fù)泵和往復(fù)式隔膜泵。

3、分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護(hù)柱以及柱溫箱。

色譜柱：色譜柱是樣品分離的。色譜柱在使用前必須仔細(xì)閱讀說明書，了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護(hù)方法等事項(xiàng)。色譜柱使用完后，需及時(shí)對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗。沖洗完成后，色譜分析價(jià)格，應(yīng)該將色譜柱從儀器上拆下來，兩端用廠家配的堵頭密封后，色譜分析，保存在色譜柱盒里。

保護(hù)柱：保護(hù)柱的作用主要是防止吸附性強(qiáng)的雜質(zhì)對(duì)色譜柱污染，從而延長色譜柱的壽命。針對(duì)不同型號(hào)的色譜柱，應(yīng)選擇相對(duì)應(yīng)填料的保護(hù)柱。應(yīng)注意柱芯也是有壽命的，應(yīng)該定期進(jìn)行更換。

柱溫箱：色譜柱溫度變化，可能會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化。為了避免這個(gè)問題，建議使用柱溫箱。

4、檢測(cè)系統(tǒng)液相色譜常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器三種。

5、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

液相色譜的分離過程

同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A、B和C，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時(shí)間長，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間，第二個(gè)流出色譜柱。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達(dá)到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問題，也是分離的首要條件。

其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān)。所以分離效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。

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