如何用制備色譜柱制備低含量的雜質(zhì)？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，高壓制備色譜系統(tǒng)多少錢，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質(zhì)，初步提純后用高分辨的LC-MS進(jìn)行定性分析。如何設(shè)定色譜條件，如，流量、進(jìn)樣量、樣品的濃度、切割點的設(shè)置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質(zhì)靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，高壓制備色譜系統(tǒng)哪個生產(chǎn)廠家好，否則流動相中的雜質(zhì)會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準(zhǔn)確，檢測器的響應(yīng)時間設(shè)到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2，大約為4mL/min。進(jìn)樣量設(shè)到幾個mg應(yīng)該基本沒有過載。進(jìn)樣樣品濃度越高越好。假如進(jìn)樣10mg，理論計算0.05%的雜質(zhì)大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

工業(yè)制備色譜

工業(yè)制備色譜系統(tǒng).電氣柜設(shè)置在機架內(nèi)部左上端，過墻兩通連接二號兩通球閥，二號兩通球閥通過單向閥連連接流量調(diào)節(jié)閥，一號質(zhì)量流量計一端連接流量調(diào)節(jié)閥，質(zhì)量流量計另一端通過混合器連接至三號三通球閥與數(shù)個進(jìn)樣泵，進(jìn)樣泵通過二號三通球閥連接壓力變送器，一號三通球閥通過管道分別連接至在線過濾器與二號質(zhì)量流量計，二號質(zhì)量流量計則通過壓力變送器與一號兩通球閥連接至流量計顯示器，高壓制備色譜系統(tǒng)，電機連接進(jìn)樣泵;采用上述技術(shù)方案后，本實用新型有益效果為:其分離效率和生產(chǎn)能力大大高于傳統(tǒng)的柱層析設(shè)備，并可實現(xiàn)在線監(jiān)測，保證產(chǎn)品的質(zhì)量.

制備色譜能當(dāng)分析色譜用嗎？

目前，很多客戶的要求都傾向于買一臺液相能同時解決制備和分析的所有問題，那就相當(dāng)OK。這樣的客戶大多是科研經(jīng)費緊張，好不容易批下來點錢，不想都花在后期純化和分析上，所以盡量二合一。

在我看來，分析液相和制備液相是通用的，只是精度的差別問題。比如，分析的液相一般流速在0.1～10mL/min，活塞的一個沖程大概是10μL，而普通的制備液相一般都是10～100mL的流速，因此活塞桿的尺寸也會變大，一個沖程差不多是100μL；流速的精度相對來說就差了很多。流速大了，管路也相應(yīng)的粗了不少，以降低高流速帶來的背景壓力；但這樣的儀器用于分析的話，柱后的擴散現(xiàn)象相當(dāng)?shù)膮柡?，即使在色譜柱上達(dá)到基線分離的兩個峰，由于柱后擴散的作用，到達(dá)檢測器的時候，差不多又會合到一起了；另外就是檢測器的差異，主要是檢測池的大小和狹縫的大小不同帶來的靈敏度的不同。制備儀器一般靈敏度是分析的1/20，以保證大量進(jìn)樣后，不會超過量程太多而平頭，分不清到底分沒分開了。

倒是有個折中的辦法，就是買分析型的液相，然后接個半制備的色譜柱。半制備就是直徑一厘米的柱子，流速5mL以內(nèi)，因此這個分析液相能達(dá)到；進(jìn)樣量大約是分析柱的10～20倍，檢測器可能會平頭，沒關(guān)系，換個波長，高壓制備色譜系統(tǒng)價格，找個吸收較弱的波長當(dāng)檢測波長就OK了，不是大量制備的話，我想基本可以滿足需要了。

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