馬尾藻是我國(guó)南海常見的大型經(jīng)濟(jì)褐藻,也是褐藻多糖的重要來(lái)源。褐藻多糖及其降解產(chǎn)物—褐藻寡糖,具有眾多生物活性,在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。以采自海南瓊海海域的孤囊馬尾藻為研究對(duì)象,探究了一種有效提取褐藻多糖和酶解制備褐藻寡糖的方法,并對(duì)制備的褐藻多糖及寡糖進(jìn)行純化、結(jié)構(gòu)分析和活性評(píng)價(jià)。研究結(jié)果如下:采用超聲波輔助熱堿法,通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化獲得孤囊馬尾藻多糖的比較好提取工藝,在超聲功率500W、料液比1:25、提取時(shí)間5.95h、提取溫度82.27℃、NaOH質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.87%的條件下粗多糖得率為41.23%±0.98%。采用TCA沉淀法除蛋白，內(nèi)蒙古好的褐藻寡糖,粗多糖的蛋白去除率達(dá)到81.93%,多糖保留率92.17%;優(yōu)化了H2O2氧化法除色素工藝,在H2O2濃度1.5%、70℃條件下脫色6h時(shí),脫色率達(dá)到91.23%,多糖保留率為85.32%。采用DEAE-52離子交換層析柱對(duì)初步純化后的多糖進(jìn)一步分離純化，內(nèi)蒙古好的褐藻寡糖,獲得SOP1、SOP2和SOP3三個(gè)多糖組分,并明確了它們的分子量、純度以及總糖、還原糖、蛋白、硫酸根和糖醛酸的含量，內(nèi)蒙古好的褐藻寡糖。采用自主分離的產(chǎn)褐藻膠裂解酶類芽孢桿菌新種,發(fā)酵制備粗酶液,發(fā)酵液酶活為15.20U/ml。噴施褐藻寡糖后發(fā)現(xiàn)褐藻寡糖可以緩解小麥在干旱環(huán)境中受到的損害。內(nèi)蒙古好的褐藻寡糖

    對(duì)初步純化的褐藻膠裂解酶進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)研究,酶的適反應(yīng)條件為50℃、pH8,在4～40℃、pH6～8范圍內(nèi)酶活力較穩(wěn)定;Ca2+、Mg2+和Fe2+等離子對(duì)該酶有促進(jìn)作用,EDTA、Ba2+、Zn2+等有抑制作用。通過(guò)優(yōu)化獲得褐藻膠的好酶解條件,在底物濃度、加酶量、體系、45℃條件下反應(yīng)32h時(shí),還原糖生成量為。以提取的褐藻多糖為原材料,按照此酶解工藝大量制備褐藻寡糖,通過(guò)Bio-GelP2凝膠色譜柱分離純化,得到不同聚合度的7個(gè)寡糖組分F1-F7,TLC分析結(jié)果顯示,其聚合度在1-7之間。去除自由基結(jié)果表明,褐藻多糖和寡糖都具有較強(qiáng)的抗氧化活性。自由基去除率隨著糖濃度的增加而增強(qiáng),在寡糖濃度、多糖濃度±±。多糖、寡糖濃度為±±。在相對(duì)濕度為85%和62%的環(huán)境下,褐藻多糖和褐藻寡糖都表現(xiàn)出較強(qiáng)的吸濕能力,褐藻寡糖更佳。在干燥環(huán)境下,褐藻多糖和寡糖都表現(xiàn)出很強(qiáng)的保濕效果,36h時(shí)褐藻寡糖的保濕率達(dá)到。抑菌結(jié)果顯示,褐藻寡糖對(duì)白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌均具有較好的抑菌作用,褐藻多糖對(duì)白色念珠菌具有抑菌效果,對(duì)另3種細(xì)菌無(wú)抑制。 山東褐藻寡糖婦科抑菌褐藻寡糖噴后6小時(shí)內(nèi)遇雨補(bǔ)噴，本品不要與堿性農(nóng)藥等物質(zhì)混用。

褐藻寡糖對(duì)SOD活性的影響SOD是植物體內(nèi)重要抗逆酶類之一,能夠催化O-2·歧化反應(yīng),生成H2O2和O2,H2O2在POD、CAT和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為水而去除,各種環(huán)境脅迫均能不同程度提高其活力,以增強(qiáng)植物去除O-2·能力。隨著低溫脅迫時(shí)間延長(zhǎng),水處理組細(xì)胞損傷加劇,SOD活力不斷上升,去除O-2·能力逐漸增強(qiáng)。噴施ADO后進(jìn)行低溫脅迫,0.05%,0.20%,0.30%ADO組SOD活力短時(shí)間內(nèi)迅速上升,說(shuō)明ADO對(duì)煙C的SOD活力產(chǎn)生了誘導(dǎo)作用,隨著時(shí)間變化O-2·產(chǎn)生和去除達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡,其SOD活力緩慢回落,以0.20%濃度ADO誘導(dǎo)效果比較好,SOD活力6h后誘導(dǎo)增強(qiáng)至空白對(duì)照的6倍,這對(duì)于提高煙C去除O-2·能力具有重要作用。0.10%濃度ADO在6～24h之內(nèi)沒(méi)有明顯改變SOD活力大小,維持在比較恒定水平,但48hSOD活力迅速上升,表明細(xì)胞內(nèi)O-2·含量增加,細(xì)胞受到了損傷破壞。高濃度1.00%ADO會(huì)破壞煙C葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu),造成保內(nèi)物質(zhì)滲漏,加劇低溫下葉片損傷,超出了植株自身修復(fù)能力,產(chǎn)生了毒副作用,SOD活力逐漸降低。

AOS能夠增強(qiáng)植株對(duì)病毒病和致病疫霉的抗性。進(jìn)一步研究表明,AOS誘導(dǎo)的植物抗病毒病的機(jī)制可能是AOS促進(jìn)植物體內(nèi)SA含量增加,激發(fā)SA信號(hào)通路,一方面促使植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生,增強(qiáng)植物抵抗病毒的侵染;另一方面SA信號(hào)通路直接激發(fā)下游防御基因的表達(dá),進(jìn)而增強(qiáng)植物抗病。AOS誘導(dǎo)植物抗致病疫霉的機(jī)制可能是AOS一方面通過(guò)提高ROS的產(chǎn)生及抗病相關(guān)基因的表達(dá),減輕致病疫霉造成的脅迫,增強(qiáng)植株抗性;另一方面,AOS通過(guò)調(diào)控氣孔的關(guān)閉和胼胝質(zhì)的沉積,抵抗致病疫霉的入侵。褐藻寡糖分子量低，水溶性強(qiáng)，穩(wěn)定性高，具有很多生物活性，如抗瘤、抑菌、抗逆性等。

AOS增強(qiáng)植株對(duì)致病疫霉的抗性用100μg/mLAOS分別噴施擬南芥和本氏煙,24h后,接種致病疫霉。結(jié)果顯示與噴施ddH2O的植株相比,AOS處理的葉片接種部位的水漬及葉片的黃化程度明顯降低,檢測(cè)致病疫霉菌絲的生長(zhǎng)量也明顯低于對(duì)照,表明AOS也可以增強(qiáng)植株對(duì)致病疫霉的抗性。AOS誘導(dǎo)植物早期免疫應(yīng)答反應(yīng)對(duì)噴施AOS和ddH2O的本氏煙葉片進(jìn)行相關(guān)免疫反應(yīng)的檢測(cè)。結(jié)果顯示,在氣孔開度方面,與ddH2O處理的對(duì)照組相比,AOS處理的本氏煙葉片的氣孔開度明顯較低,表明AOS通過(guò)調(diào)節(jié)葉片表面氣孔的開合抑制病原菌的入侵。分別于2h、4h、8h、24h和48h時(shí),對(duì)噴施AOS和ddH2O的本氏煙葉片進(jìn)行DAB和NBT組織化學(xué)染色,發(fā)現(xiàn)噴施ddH2O的葉片染色程度較淺,而噴施AOS的葉片染色程度較深,且在24h時(shí)染色深。qRT-PCR檢測(cè)ROS合成基因RbohA、RbohB以及去除基因SOD、APX和CAT表達(dá)水平,顯示RbohB基因表達(dá)量明顯上調(diào),CAT基因表達(dá)量明顯下降,說(shuō)明AOS可以通過(guò)抑制CAT基因和促進(jìn)RbohB基因的表達(dá),提高過(guò)氧化氫的積累。褐藻寡糖可以通過(guò)SA信號(hào)途徑促進(jìn)NPR1和PR1蛋白基因的表達(dá)，使植株獲得系統(tǒng)性抗性，增強(qiáng)對(duì)病毒的抵抗能力。內(nèi)蒙古好的褐藻寡糖

褐藻寡糖羧基的酯化度在植物細(xì)胞誘導(dǎo)反應(yīng)中也發(fā)揮了作用將其開發(fā)為具有獨(dú)特藥理療效和具有保健功能的食品。內(nèi)蒙古好的褐藻寡糖

    寡糖對(duì)豌豆和玉米的促生長(zhǎng)作用不同。對(duì)雙子葉植物豌豆，以第7d根和芽干重的增長(zhǎng)率分別為，是通過(guò)促進(jìn)含量、蛋白酶和脂肪酶的活力來(lái)促進(jìn)種子萌發(fā)和幼苗的生長(zhǎng)；對(duì)單子葉植物玉米，以，第7d根和芽干重的增長(zhǎng)率分別為140%和，是通過(guò)促進(jìn)含量、脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶共同作用來(lái)促進(jìn)種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)的研究，發(fā)現(xiàn)，此褐藻寡糖具有的作用，在極低的濃度下能夠誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，并能夠在有2,4-D的培養(yǎng)基中促進(jìn)愈傷組織的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)。對(duì)懸浮細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，夠明顯增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的含量，從而對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)進(jìn)行調(diào)控。 內(nèi)蒙古好的褐藻寡糖

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