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液相色譜在使用過程中四大關(guān)鍵因素
1.液相色譜儀本身:對于儀器本身一般不會有問題,液相色譜,特別是剛買回來的新儀器。對于儀器本身重要的就是儀器的校驗,剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認工作(包括IQ、PQ、OQ),液相色譜報價,確認順利通過后,再請國家或省級儀器檢定局的來校驗,檢定合格后就可以放心使用了,除此之外,一些做得好的公司每半年會對儀器進行一次的內(nèi)部校驗,目的就是為了保證儀器的正??蛇\行狀態(tài)。
2.色譜條件:色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。
流動相就涉及到配制流動相所用到的水和試劑試液,水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級別,試劑試液要求用色譜級別的,原因為防止水和試劑試液中的雜質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾。
3.操作人員:首先,作為液相操作人員,一定要認真學(xué)習(xí)夜想的說明書,掌握液相硬件和軟件的操作,掌握日常的維護保養(yǎng),掌握基礎(chǔ)故障的排除和維修。
4.液相安裝環(huán)境:液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠離振動、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上,有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開,一個是防止色譜基線噪音偏大,基線不穩(wěn)等,一個是為減少對人體的危害。
色譜分離基本原理
在色譜法中存在兩相,一相是固定不動的,我們把它叫做固定相;另一相則不斷流過固定相,液相色譜哪個生產(chǎn)廠家好,我們把它叫做流動相。 液相色譜的分離原理就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。使用外力使含有樣品的流動相(氣體、液體)通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時,混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。 由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異,與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強弱不同,隨著流動相的移動,液相色譜哪個牌子好,混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡,液相色譜使得各組分被固定相保留的時間不同,從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當?shù)闹髾z測方法結(jié)合,實現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。
制備液相色譜特點和優(yōu)點
高壓—壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米降的壓為75 Kg/cm2以上。
高速—流速為0.1~10.0 ml/min。
高效—可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。
高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點:
速度快—通常分析一個樣品在15~30 min,有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率高—可選擇固定相和流動相以達到較好分離效果。
靈敏度高—紫外檢測器可達0.01ng,熒光和電化學(xué)檢測器可達0.1pg。
柱子可反復(fù)使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少,容易回收—樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。
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