親和柱親和層析過程中的注意事項(xiàng)

1、上樣

親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析柱一般很短，通常10cm左右。上樣時(shí)應(yīng)注意選擇適當(dāng)?shù)臈l件，包括上樣流速、緩沖液種類、pH、離子強(qiáng)度、溫度等，以使待分離的物質(zhì)能夠充分結(jié)合在親和吸附劑上。

2、洗脫

親和層析的另一個(gè)重要的步驟就是要選擇合適的條件使待分離物質(zhì)與配體分開而被洗脫出來。親和層析的洗脫方法可以分為兩種：特異性洗脫和非特異性洗脫。

親和柱的區(qū)別

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1ml親和柱和3ml親和柱的區(qū)別很明顯就是兩者的柱體積不一樣。

當(dāng)然親和柱有很多的種類，比如鎳螯合柱，蛋白A柱等等。

假設(shè)是同一種填料的親和柱，那么1ml親和柱和3ml親和柱的區(qū)別就是，1ml柱里面裝載了1ml體積的填料，而3ml柱里面裝載了3ml的填料。

體積越大，赭曲霉親和柱哪家好，能親和吸附的樣品就越多。

親和柱適用注意事項(xiàng)

(1) 嘔吐毒素對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次酸鈉浸泡過夜。

(2) 不要使用過有效期的親和柱。

(3) 親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。

(4) 使用前，親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。

(5) HPLC液相測定值、試劑盒計(jì)算值接近zui高檢出值時(shí)，樣本的實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿，建議減少上樣體積重新過柱。

(6) 稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整，建議不少于10g樣。

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