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5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。
⑴可以把即刻可用的"主混合物"溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃,在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì),可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個(gè)規(guī)則,應(yīng)該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染,陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。⑸當(dāng)做陽(yáng)性對(duì)照時(shí),有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用少數(shù)量的核酸。⑹由于必須有對(duì)照反應(yīng),對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。
3.應(yīng)堅(jiān)持不懈清理,嚴(yán)禁沉積臟物,防止環(huán)境污染。嚴(yán)防所有殺菌元器件和培養(yǎng)液環(huán)境污染,已污染者應(yīng)終止應(yīng)用。應(yīng)定時(shí)執(zhí)行用合適的消毒劑殺菌清理,以保證房間內(nèi)的潔凈度等級(jí)符合規(guī)定。
4.要帶入生產(chǎn)車間應(yīng)用的儀器設(shè)備,器材,平皿等所有物件,均應(yīng)捆扎密不可分,并應(yīng)根據(jù)合適的方法殺菌?! ?/p>
5.凈化工程的安全作業(yè)工作人員進(jìn)到無(wú)菌車間前,需耍用番筧或消毒劑洗手消毒,隨后在緩存間替換成型安全作業(yè)服,鞋,遮陽(yáng)帽,防霾口罩和膠手套(或用75%的酒精再度清洗兩手),即可進(jìn)到房間內(nèi)開展實(shí)際操作。
6.凈化工程應(yīng)用前需耍開啟紫外燈輻照滅菌40分鐘左右,并且一塊兒開啟超凈臺(tái)開展吹風(fēng)機(jī)。實(shí)際操作完畢,應(yīng)立即梳理無(wú)菌車間,十萬(wàn)級(jí)GMP車間,再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。
7.供試品在查詢前,應(yīng)堅(jiān)持不懈外包裝盒完好無(wú)損,不可敞開式,防止環(huán)境污染。查詢前,用75%的乙醇藥棉消毒1殺菌外表面。
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