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細(xì)胞傳代的一般操作方法是在開始細(xì)胞傳代前,蘇州市三維細(xì)胞培養(yǎng),仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全,一般主要有細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、慶大溶液(1 萬單位)、7.5%NaHC03 溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS 洗液等。工具有小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1)、細(xì)胞吹打管(20 ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱等;
操作步驟一般是鏡檢細(xì)胞,挑選生長狀態(tài)良好,細(xì)胞界限清晰,具有立體感,三維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)分類,形態(tài)好無污染、無異常及可X疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),如何進(jìn)行三維細(xì)胞培養(yǎng),加入滅活小牛血X清10m1,慶大溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細(xì)胞;先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞表面1-2 次,每次10m1,三維細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用,棄去洗液,向細(xì)胞瓶內(nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定);填寫傳代記錄。
以上方法僅供參考!
模擬微重力三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)RCCS介紹?
A、RCCS-H系列可濕熱滅菌型,反應(yīng)容器用于重復(fù)高溫、高壓滅菌(一般實驗室常用高壓滅菌鍋即可使用)。系統(tǒng)適配STLV和HARV容器,經(jīng)濟(jì)有效,長期實驗室設(shè)備。可以兼容Synthecon從10ml到500ml的任意一種類型的培養(yǎng)皿??芍貜?fù)使用的RCCS?是一個經(jīng)濟(jì)有效,長期實驗室設(shè)備。
細(xì)胞培養(yǎng)常見問題:冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
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