隨機(jī)引物擴(kuò)增技術(shù)(arbitrary primedPCR， AP- PCR)

AP-PCR技術(shù)通過(guò)隨意設(shè)計(jì)或選擇一個(gè)非特異性引物.在PCR反應(yīng)體系中.首先在不嚴(yán)格條件下使引物與模板中許多序列通過(guò)錯(cuò)配而復(fù)性。如果在兩條單鏈上相距一定距離有反向復(fù)性引物存在，則可經(jīng)Taq酶的作用使引物延伸而發(fā)生DNA部分片段的擴(kuò)增。經(jīng)一至數(shù)輪不嚴(yán)格條件下的PCR循環(huán)后，再于嚴(yán)格條件下進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)DNA測(cè)序凝膠電泳分離后.經(jīng)放1射性自顯影或熒光顯示即可得到DNA指紋圖。AP-PCR用于腫1瘤的抑制基因、癌基因的分離;菌1種、菌株及不同物種的鑒定;遺傳作圖;不同分化程度或某些不同狀態(tài)下的組織的基因表達(dá)差異等方面的研究。

原位PCR( in situ PCR)技術(shù)

原位PCR綜合了PCR和原位雜交( Insitu hybridization， ISH)的優(yōu)點(diǎn)是一種在組織切片或細(xì)胞涂片上原位對(duì)特定的DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增.再用特異性的探針原位雜交檢測(cè)。原位PCR標(biāo)本一般需先經(jīng)化學(xué)固定，以保持組織細(xì)胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞膜和核膜有一定的通透性，PCR擴(kuò)增所需的各種成分可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)或核內(nèi)。在原位對(duì)特定的DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物由于分子量較大或互相交織，不易透過(guò)細(xì)胞膜向外彌散，故保留在原位。這樣就很容易應(yīng)用ISH將其檢出，同時(shí)還可對(duì)目的DNA序列的組織細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。

突變：PCR克1隆的一大優(yōu)點(diǎn)是能夠通過(guò)克1隆將所需突變引入目的基因中，以便進(jìn)行突變研究。在 定1點(diǎn)突變中，經(jīng)過(guò)設(shè)計(jì)的PCR引物可將堿基置換、刪除或插入整合到特定序列中。引物定位到已克1隆至質(zhì)粒中的序列上。隨后，粗提物定量PCR試劑，含有引入突變的PCR產(chǎn)物通過(guò)自我連接，重新生成環(huán)狀質(zhì)粒，并用于轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞。

測(cè)序：PCR是為測(cè)序富集模板DNA的一種相對(duì)簡(jiǎn)單的方法。為保證DNA序列準(zhǔn)確性，強(qiáng)烈建議使用高保真PCR來(lái)制備測(cè)序模板。在 Sanger測(cè)序中，PCR擴(kuò)增片段經(jīng)純化并用于測(cè)序反應(yīng)。使用常用的測(cè)序引物結(jié)合位點(diǎn)對(duì)PCR引物的 5′末端進(jìn)行標(biāo)記，以簡(jiǎn)化測(cè)序工作流程。

         二代測(cè)序 （NGS）中，PCR被廣泛用于構(gòu)建DNA測(cè)序文庫(kù)。在NGS文庫(kù)制備中，DNA樣品通過(guò)PCR反應(yīng)富集（在起始量有限的情況下）并使用adaptor（以及用于多重檢測(cè)的index）標(biāo)記。除了具有高保真度，DNA聚合酶還應(yīng)具有zui小的擴(kuò)增偏好性，從而使測(cè)序文庫(kù)具有高覆蓋度。

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