復(fù)合PCR(multiplex PCR)技術(shù)

在同一反應(yīng)中用多組引物同時擴增幾種基因片段.如果基因的某一區(qū)段有缺失則相應(yīng)的電泳譜上這一區(qū)帶就會消失。復(fù)合PCR主要用于同一病原體的分型及同時檢測多種病原體、多個點突變的分子病的診斷。

重組PCR技術(shù)

重組PCR技術(shù)是在兩個PCR擴增體系中，兩對引物分別由其中之一在其5°-端和3-端引物上帶.上一段互補的序列混合兩種PCR擴增產(chǎn)物.經(jīng)變性和復(fù)性。兩組PCR產(chǎn)物互補序列發(fā)生粘連。其中一條重組雜合鏈能在PCR條件下發(fā)生聚合延伸反應(yīng)，產(chǎn)生一個包含兩個不同基因的雜合基因。

原位PCR( in situ PCR)技術(shù)

原位PCR綜合了PCR和原位雜交( Insitu hybridization， ISH)的優(yōu)點是一種在組織切片或細胞涂片上原位對特定的DNA或RNA進行擴增.再用特異性的探針原位雜交檢測。原位PCR標(biāo)本一般需先經(jīng)化學(xué)固定，以保持組織細胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)。細胞膜和核膜有一定的通透性，PCR擴增所需的各種成分可進入細胞內(nèi)或核內(nèi)。在原位對特定的DNA或RNA進行擴增。擴增產(chǎn)物由于分子量較大或互相交織，不易透過細胞膜向外彌散，故保留在原位。這樣就很容易應(yīng)用ISH將其檢出，同時還可對目的DNA序列的組織細胞進行形態(tài)學(xué)分析。

目前的病毒核酸檢測試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法，通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否含有病毒核酸。那么，核酸檢測到底需要經(jīng)過哪些步驟呢？概括起來，gDNA去除反轉(zhuǎn)錄試劑盒，是 取樣、留樣、保存、核酸提取和上機檢測五個步驟。

取樣

采集人體的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及雙側(cè)扁桃體處

留樣

將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部后立即旋緊管蓋

保存

將樣本管放入密封袋中保存好，并及時送檢

核酸提取

將樣本送進實驗室進行核酸提取

上機檢測

將提取物進行熒光PCR擴增反應(yīng)

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