限制酶作為酶類，訣定其催化作用具有高1效性、專一性和作用條件溫和等特點(diǎn)。其中專一性的具體表現(xiàn)為:某種限制酶只能催化DNA上特定序列特定位點(diǎn)的磷酸二脂鍵水解，結(jié)果是使DNA分子被分割成不同的DNA部分片段。限制酶所識(shí)別的雙鏈DNA上的序列具有“回文對(duì)稱”性質(zhì)，即無論是奇數(shù)個(gè)堿基還是偶數(shù)個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線，中心軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時(shí)，即錯(cuò)位平切，產(chǎn)生的是黏性末端;當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)，即平切，產(chǎn)生平末端。錯(cuò)位切的限制酶在基因工程中比較會(huì)常使用到，因?yàn)榕c平末端相比較，黏性末端更有利于DNA部分片段的連接。

限制性內(nèi)切酶的質(zhì)量控制鑒定

限制性內(nèi)切酶的一個(gè)活性單位是指，在50μl 的反應(yīng)體系里，采用隨酶提供的 NEBuffer，用1個(gè)小時(shí)的時(shí)間，內(nèi)切酶，消化1μg底物DNA所需要的酶量。酶切反應(yīng)應(yīng)在帶蓋的eppendorf 管中進(jìn)行，選用技術(shù)數(shù)據(jù)卡上所標(biāo)明的適宜溫度。在確定酶活性之前，濃縮的酶應(yīng)該用推薦的貯存液稀釋成大約1，000 單位/ml。

質(zhì)量控制

所有質(zhì)量控制鑒定結(jié)果都公布在隨酶提供的技術(shù)數(shù)據(jù)卡上。

DNA部分片段的連接

　　DNA部分片段通過用每一種限制性內(nèi)切酶過量消化底物DNA而獲得。這些片段隨后用T4 DNA連接酶連接( 5′末端濃度為0.1-1.0 μM)。連接的片段然后用同一種限制性內(nèi)切酶重切。僅當(dāng)3′和 5′末端都保留完整，連接反應(yīng)才會(huì)發(fā)生;而且只有那些識(shí)別位點(diǎn)完全恢復(fù)的分子才能被重切。切割后正常的帶型說明3′和 5′末端都是完整的，而且準(zhǔn)備的酶樣品中檢測(cè)不到核酸外切酶和磷酸酶。

內(nèi)切酶-友名生物公司由武漢友名生物技術(shù)有限公司提供?！吧虅?wù)服務(wù)”選擇武漢友名生物技術(shù)有限公司，公司位于：湖北武漢市洪山區(qū)野芷湖西路16號(hào)創(chuàng)意天地辦公04棟701，多年來，友名生物堅(jiān)持為客戶提供好的服務(wù)，聯(lián)系人：董先生。歡迎廣大新老客戶來電，來函，親臨指導(dǎo)，洽談業(yè)務(wù)。友名生物期待成為您的長(zhǎng)期合作伙伴！