轉(zhuǎn)移RNA

轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）在蛋白質(zhì)合成過程中負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸、解讀mRNA遺傳密碼。tRNA占細(xì)胞總RNA的10%~15%，絕大多數(shù)位于細(xì)胞質(zhì)中。tRNA由Crick于1955年提出其存在，Zamecnik和 Hoagland于1957年鑒定。

tRNA一級(jí)結(jié)構(gòu)具有以下特點(diǎn)：

①是一類單鏈小分子RNA，長73~95nt（共有序列76nt），沉降系數(shù)4S。

②是含稀有堿基zui多的RNA，含7-15個(gè)稀有堿基（占全部堿基的15%~20%），位于非配對(duì)區(qū)。

③5′末端堿基往往是鳥piao呤。

④3"端是CCA序列，其中的腺苷酸常稱為A76，其3’—OH是氨基酸結(jié)合位點(diǎn)。

tRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)

約50%堿基配對(duì)，形成四段雙螺旋，與五段非配對(duì)序列形成三葉草形結(jié)構(gòu)。

該結(jié)構(gòu)中存在四臂四環(huán)：

①氨基酸臂。 

②二氫尿C4H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氫尿C4H4N2環(huán)（DHU環(huán)、D環(huán)），特征是含二氫尿C4H4N2（DHU、D）。 

③反密碼子臂和反密碼子環(huán)，特征是反密碼子環(huán)含反密碼子。反密碼子5′端與尿苷酸連接，3′端與piao呤核苷酸連接。TΨC臂（T臂）和TΨC環(huán)（Ψ環(huán)），特征是TΨC環(huán)含胸腺C4H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④額外環(huán)3~21nt。

tRNA三級(jí)結(jié)構(gòu)呈L形，氨基酸結(jié)合位點(diǎn)位于其一端，反密碼子環(huán)位于其另一端，DHU環(huán)和TΨC環(huán)雖然在二級(jí)結(jié)構(gòu)中位于兩側(cè)，但在三級(jí)結(jié)構(gòu)中卻相鄰。盡管各種tRNA的長度和序列不盡相同，但其三級(jí)結(jié)構(gòu)相似，提示三級(jí)結(jié)構(gòu)與其功能密切相關(guān)。

植物ＤＮＡ的ＣＴＡＢ提取法：

1 稱取新鮮葉片2-3ｇ，剪碎放入研缽中，在液氮中研磨成粉末。

2 將粉末轉(zhuǎn)移到的加有7ｍｌ經(jīng)預(yù)熱的1 5×ＣＴＡＢ提取緩沖液15ｍｌ離心管中，迅速混勻后置于65℃水浴中，溫育30ｍｉｎ。

3 取出離心管，冷卻至室溫，加入氯1仿/異戊1醇(24:1)，充分混勻，室溫下2300×ｇ離心20ｍｉｎ。

4 將上清轉(zhuǎn)移至另一新的15ｍｌ離心管中，加入1/10體積10%的ＣＴＡＢ和等體積的氯1仿/異戊1醇。充分混勻，質(zhì)粒提取試劑盒，2300×ｇ離心20ｍｉｎ。

5 轉(zhuǎn)移上清至另一新的15ｍｌ離心管中，加入等體積1%的ＣＴＡＢ沉淀緩沖液，輕輕搖晃至形成ＤＮＡ絮狀沉淀。1000×ｇ離心10ｍｉｎ，使ＤＮＡ沉淀于管底。

6 加入1 5-2ｍｌ的1ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ及5μｌＲＮａｓｅ置于56℃水浴中過夜。待ＤＮＡ完全溶解后，加2-3ｍｌ4℃預(yù)冷的95%的冰乙醇使ＤＮＡ沉淀，挑出ＤＮＡ，置于1 5ｍｌ離心管中，用70%乙醇清洗30ｍｉｎ，用離心機(jī)甩5ｓ，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5ｍｉｎ，倒出95%乙醇，在超凈工作臺(tái)上吹干。

7 將風(fēng)干的ＤＮＡ直接在4℃保存?zhèn)溆没蛉苡?00μｌＴＥ溶液中于-20℃保存。

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