限制酶分布區(qū)域

限制性核酸內(nèi)切酶分布極廣，幾乎在所有細菌的屬、種中都發(fā)現(xiàn)至少一種限制性內(nèi)切酶，多者在一屬中就有幾十種，例如在嗜血桿1菌屬中（Haemophilus）現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的就有22種。有的菌株含酶量極低，很難分離定性；然而在有的菌株中，酶含量極高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius(Hal Ⅲ酶）就是高產(chǎn)酶菌株。據(jù)報道從10g的H. aegyptius的細胞中，能分離提純出可消化l0gλ噬菌體DNA的酶量。細菌是限制性內(nèi)切酶，尤其是特異性非常強的I類限制性內(nèi)切酶的主要來源。

幾種酶的比較及限制酶

1幾種酶的比較

(1)限制性內(nèi)切酶:作用于DNA分子，切割磷酸二酯鍵，形成黏性末端或平末端。

(2) DNA連接酶:作用于DNA分子片段，連接磷酸二酯鍵，形成重組DNA分子。

(3) DNA聚合酶:作用于脫氧核苷酸，連接磷酸二酯鍵，形成新的DNA分子。

(4)解旋酶:作用于DNA分子，作用于氫鍵，形成DNA分子的單鏈。

2.限制酶:

(1)一種限制酶通常只識別一種特定的堿基序列，但是有少數(shù)限制酶卻可以識別不止

一種堿基序列。

(2)不同限制酶也可以識別同-堿基序列;

(3)不同限制酶識別的堿基序列雖然不同，mRNA切割酶，但切出的末端也可能相互連接。

質(zhì)粒載體和外源ＤＮＡ中限制酶切位點的性質(zhì)

    如今，質(zhì)粒載體中限制酶切位點的種類極為繁多，因而通常都有可能找到某種帶限制酶切位點恰恰與外源ＤＮＡ部分片段本身毫無二致的載體。這就具備一個不可1比擬的優(yōu)點，也應(yīng)是可以用相應(yīng)的限制酶消化重組質(zhì)粒崦回收外源ＤＮＡ。另一種方案，則是把片段插入到載體中能產(chǎn)生匹配末端的任何位點中。例如，識別不同的六核苷酸的限制酶BamHl和BglⅡ產(chǎn)生具有相同突出末端的限制酶切片段，這樣用BglⅡ消化而制備的外源ＤＮＡ部分片段可以克1隆到用BanHl消化的質(zhì)粒中。這通常會使接合序列不能被曾用于外源ＤＮＡ或制備載體的任何一種酶所切開。然而很多清況下，用切點位于多克1隆序列側(cè)翼的限制酶進行消化，可將片段從重組質(zhì)粒中摘出。偶爾在質(zhì)粒的以及外源ＤＮＡ兩端的限制酶切位點之間，不可能找到“門當(dāng)戶對”的搭配關(guān)系。這時可用下面兩種方案加以解決：

   1）在線狀質(zhì)粒末端和（或）外源ＤＮＡ部分片段的末端接上合成在接頭或銜接頭。

   2）在得到控制的反應(yīng)條件下，用大腸桿1菌ＤＮＡ聚合酶I Ｋlenow片段部分補平帶3凹端的ＤＮＡ部分片段。如第九章所討論，這樣常可以使那些不相匹配的限制酶切位點轉(zhuǎn)變?yōu)榛パa末端，從而促進載體和外源ＤＮＡ的連接。因為部分補平的反應(yīng)消除了同一分子兩端彼此配對的能力，故連接反應(yīng)過程中環(huán)化和自身寡聚化的機會也會有所降低

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