堿性磷酸酶是一種能夠?qū)孜锶チ姿峄拿?，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物1堿等。而該脫去磷酸基團的過程被稱為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶是磷酸酶的一種，磷酸酶的作用與激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，將磷酸基團加到對應底物分子上。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境有zui大活力，對來源于細菌中的ALP來說，其zui適pH是8.0，而對來源于牛的ALP則是8.5。

DNA連接酶的性質(zhì)

大腸桿1菌的DNA連接酶是一條分子量為75Ku的多肽鏈。對胰蛋白酶敏感，T7 RNA聚合酶，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶與NAD(而不是ATP)反應形成酶-AMP中間物，但不能繼續(xù)將AMP轉(zhuǎn)移到DNA上促進磷酸二酯鍵的形成。DNA連接酶在大腸桿1菌細胞中約有300個分子，和DNA聚合酶Ⅰ的分子數(shù)相近，這也是比較合理的現(xiàn)象。因為DNA連接酶的主要功能就是在DNA聚合酶Ⅰ催化聚合，填滿雙鏈DNA上的單鏈間隙后封閉DNA雙鏈上的缺口。這在DNA copy、修復和重組中起著重要的作用，連接酶有缺陷的突變株不能進行DNA copy、修復和重組。

長基因組序列、特別是包含大的基因簇的那些的克1隆對于產(chǎn)生medicine和生物燃料的合成生物學和基因工程工作特別重要。傳統(tǒng)的基于PCR的克1隆方法通常受限于DNA模板的長度和GC含量：標準的PCR反應常規(guī)產(chǎn)生至多10 kb的片段，而更長的PCR產(chǎn)物需要反應條件的繁瑣優(yōu)化，并且甚至在理想條件下，通常受限于35 kb5?；蛘撸赏ㄟ^裝配多個短片段，例如重疊PCR產(chǎn)物或化學合成的DNA寡聚物，產(chǎn)生長的目的基因組序列，但這樣的方法趨于耗時和昂貴，特別是對于獲得長于50 kb的序列(其通常需要3-5階段，每個包含多個裝配事件)6，7。獲得長的基因組序列的另一方法是通過基因組DNA的限制性酶消化。




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