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在 pH和 pKa相同的情況下，吸附型SPE柱規(guī)格，[a]/[HA]為1。這就是說，此時50%弱酸性化合物是陰離子態(tài)，另50%為中性態(tài)。這種 pH環(huán)境下，即使這些呈陰離子狀態(tài)的化合物地被陰離子交換劑吸附，然后地洗脫，也只能得到50%的回收率。由于只有50%的弱酸化合物處于離子狀態(tài)，所以被陰離子交換劑吸附。因此，控制環(huán)境 pH值對于離子交換固相萃取非常重要。

較弱的酸性化合物離子化的程度越高，代表了較強的[A=[HA]。從理論上講，當(dāng)[A]/[HA]等于100時，99%的弱酸性化合物都是陰離子，并且能被陰離子交換劑吸附。按照式三，要使弱酸性化合物在陰離子固相萃取吸附時99%的離子化，樣品基質(zhì)的 pH值應(yīng)高于化合物 pKa至少兩個 pH單位。相反，在對弱酸性化合物的洗脫過程中，環(huán)境中的 pH值應(yīng)調(diào)整到低于化合物 pKa的至少兩個 pH單位以下，此時弱酸性化合物99%是中性狀態(tài)，晉中吸附型SPE柱，用適當(dāng)?shù)娜軇年庪x子交換柱洗脫。

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淋洗液如果是水，不進行抽干，就會有一部分被收集到洗脫液中，洗脫液如果進行氮吹，則含水的洗脫液也很難進行抽干。

如果進行長時間的氮吹，吸附型SPE柱分類，則少量的水溶液會被吹干，從而導(dǎo)致回收率較低的情況出現(xiàn)，因此淋洗后就需要進行抽干操作。

洗脫后會有部分洗脫溶劑殘留在填料上，填料用量較大時，洗脫液甚至?xí)埩?~2毫升，使洗脫液不能完全回收，造成回收率低、平行性差。

為確保洗脫的溶劑和目標(biāo)物得到充分回收，還需要對其進行脫水。

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當(dāng)選用柱狀規(guī)格時，必須考慮到目標(biāo)化合物和在萃取條件下可能吸附的總干擾物，而不僅僅是目標(biāo)化合物。另外，即使目標(biāo)化合物未超過柱容量， SPE柱在保留目標(biāo)化合物的同時也保留了部分干擾物，由于兩者的總量已超過柱容量，其結(jié)果必然是部分目標(biāo)化合物無法保留在 SPE柱中。

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預(yù)處理溶劑和參數(shù)的選?。?/p>

確定預(yù)處理 SPE柱所用溶劑及其用量和流速，并進行平衡。在反相或離子交換柱中，通常以或極性為預(yù)處理溶液，以水或緩沖溶液為平衡溶液。

樣本過柱流速度的選擇：下一步是確定樣品通過 SPE柱流動速度。過柱流速與 SPE試樣中填充物的粒徑分布、填充物的填充密度、目標(biāo)化合物與試樣基質(zhì)的結(jié)合程度、試樣的粘度等因素有關(guān)。

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近幾年來，分析檢測技術(shù)取得了長足的進步，但樣品前處理仍是科研工作者面臨的挑戰(zhàn)。以下由小析姐與大家聊聊固相萃取小柱法開發(fā)中需要注意的問題。

固相萃取(Solid Phase Extraction，簡稱 SPE)是20世紀70年代中期發(fā)展起來的樣品前處理技術(shù)，其用途廣泛，并日益受到人們的歡迎。按其不同的吸附填料和吸附機理，主要分為正相、反相、離子交換和混合固相萃取小柱。正相、反相固相萃取小柱主要用于萃取極性和非極性化合物，而對某些帶電物質(zhì)(離子化合物)的萃取回收率較低，例如C18固相萃取小柱，當(dāng)目標(biāo)化合物處于離子狀態(tài)時，C18對該化合物的能力因子顯著降低。

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正相態(tài)時，溶液體系的極性應(yīng)按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞增，洗脫強度也隨之遞增。要確保所選的樣本溶劑不會洗脫目標(biāo)物，所選的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下，吸附型SPE柱選擇，zui大限度地洗脫干擾物，這樣洗脫目標(biāo)物才能碰巧完全洗脫目標(biāo)物。鑒于大部分化合物都具有多種功能基團，在實際操作中，主要根據(jù)目標(biāo)物和干擾物的性質(zhì)考慮采用何種萃取機理。例如：2-萘胺為弱堿性化合物(pKa=4.16)，在一定 pH條件下可呈陽離子化狀態(tài)，同時又具有疏水和親水基。此時可根據(jù)樣品基質(zhì)選擇有利于目標(biāo)物與干擾物分離的萃取機理。

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