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廣州碩譜生物科技有限公司,反相SPE柱,是目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)SPE小柱較好的生產(chǎn)廠家。Card-GCB固相萃取柱品牌
相對(duì)于弱酸性化合物而言,弱堿性化合物在陽(yáng)離子交換固相萃取過(guò)程中99%的分解都是陽(yáng)離子,這一弱堿性化合物所處的環(huán)境系統(tǒng)的 pH值必須低于其 pKa至少兩個(gè) pH單位。洗脫時(shí),環(huán)境體系的 pH值應(yīng)高于化合物的 pKa值至少兩個(gè) pH單位,Card-GCB固相萃取柱品牌,99%的化合物此時(shí)為中性狀態(tài),可通過(guò)適當(dāng)?shù)娜軇年?yáng)離子交換柱中洗脫。
選擇離子交換固相萃取柱的種類:為能有效地洗脫吸附在一起的離子化合物,對(duì)于含有強(qiáng)離子官能團(tuán)的目標(biāo)化合物,一般選用弱離子交換柱;對(duì)于含有弱離子官能團(tuán)的化合物,一般選用強(qiáng)離子交換柱。該方法可避免目標(biāo)化合物與吸附劑官能團(tuán)同時(shí)處于離子化狀態(tài),使目標(biāo)化合物始終保持在不能洗脫的保留狀態(tài)。
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有時(shí),強(qiáng)溶劑 B也不能除去色譜柱中殘留的污染物。然后需要使用更強(qiáng)的溶劑或混合多種溶劑。若污染物不是生物質(zhì),一種強(qiáng)溶劑或多種溶劑的聯(lián)合清洗基本上可以解決這個(gè)問(wèn)題。圓柱制造商的網(wǎng)頁(yè)和產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中也有許多清潔方法的建議。各種清潔方法的模式通常相似,溶劑系列中使用的溶劑的強(qiáng)度逐步提高,zui后一種溶劑往往非常具有非極性(疏水性)(例如乙i酸乙i酯甚至是烷烴),以便于將脂質(zhì)、油等非極性污染物溶解。每一種溶劑在一個(gè)溶劑系列中保證與另一溶劑互溶。在整個(gè)清潔過(guò)程結(jié)束后,在返回到原來(lái)的流動(dòng)相系統(tǒng)之前,必須要通過(guò)一種強(qiáng)度適中、互溶性很好的溶劑過(guò)渡。舉例來(lái)說(shuō),異丙i醇是一種很好的過(guò)渡溶劑,它可以與正己烷或二氯甲i烷以及水相中的溶劑互溶。但異丙i醇粘度很大,必須保證低流速,以免使泵壓過(guò)高。
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反相分離柱C18的適用范圍
C18反相分離柱廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取,藥1物合成研究與開(kāi)發(fā),生物制藥等領(lǐng)域。若樣品極性偏大, Rf值非常接近,則不能分離正相模式;終產(chǎn)物要求純度98%以上,采用正相模式達(dá)不到;樣品在正相條件下存在溶解問(wèn)題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術(shù)的成熟和良好的分離能力,C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。
反相式C18反相分離柱的主要參數(shù)
分離柱C18有多種參數(shù),大致可分為四個(gè)方面:相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內(nèi)徑、柱長(zhǎng))和隱藏參數(shù)(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個(gè)大家容易忽略的
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反向作用機(jī)制:
反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)與目標(biāo)化合物碳?xì)滏I之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質(zhì)中提取分離出非極性和中等極性的目標(biāo)化合物。
對(duì)利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標(biāo)化合物,可用氯1仿、環(huán)己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當(dāng)溶劑的洗脫強(qiáng)度足夠大,可以使目標(biāo)化合物與吸附劑非極性基團(tuán)間的范德華力不受影響時(shí),使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強(qiáng)的甲1醇,對(duì)許多化合物而言,也有足夠的非極性力量來(lái)洗脫它。有時(shí)候,單種溶劑無(wú)法完全洗脫疏水性的目標(biāo)化合物,可以考慮使用二氯甲1烷:乙1酸乙1酯(1:1,體積比)。
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常用極性固定相包括:硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土和含有氰基(CN)、氨基(NH2)、二醇基(2 OH)的粘接硅膠。
正相態(tài)時(shí),溶液體系的極性應(yīng)按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞增,洗脫強(qiáng)度也隨之遞增。要確保所選的樣本溶劑不會(huì)洗脫目標(biāo)物,所選的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下,很大限1度地洗脫干擾物,這樣洗脫目標(biāo)物才能碰巧完全洗脫目標(biāo)物。
因此,面對(duì)反相、正相固相萃取,在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)選擇哪一種?鑒于大部分化合物都具有多種功能基團(tuán),在實(shí)際操作中,主要根據(jù)目標(biāo)物和干擾物的性質(zhì)考慮采用何種萃取機(jī)理。
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負(fù)離子交換填充物(SAX, MAX)
·分析物:陰離子(酸)化合物
·方法:
(a)活化:樣品在非極性有機(jī)溶1劑中作活化處理時(shí),可用樣品溶劑:在極性溶劑中作樣品處理時(shí),可用水溶性有機(jī)溶1劑作活化處理,然后用水平衡,然后用合適 pH值的緩沖液平衡。
上樣:樣品溶液的 pH值應(yīng)大于其 pKa的兩個(gè)單位(以保證其電荷)。
洗脫液 pH值:洗脫液 pKa小于兩個(gè)單位(中和分析物的電荷)。
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