色譜法的分離方法，有柱色譜法、紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法等。色譜所用溶劑應與試樣不起化學反應，并應用純度較高的溶劑。色譜時的溫度，除氣相色譜法或另有規(guī)定外，系指在室溫下操作。分離后各成分的檢出，應采用各單體中規(guī)定的方法。通常用柱色譜、紙色譜或薄層色譜分離有色物質(zhì)時，可根據(jù)其色帶進行區(qū)分，對有些無色物質(zhì)，可在245-365nm的紫外燈下檢視。紙色譜或薄層色譜也可噴顯色劑使之顯色。薄層色譜還可用加有熒光物質(zhì)的薄層硅膠，采用熒光熄滅法檢視。用紙色譜進行定量測定時，可將色譜斑點部分剪下或挖取，用溶劑溶出該成分，再用分光光度法或比色法測定，也可用色譜掃描儀直接在紙或薄層板上測出，也可用色譜掃描儀直接以紙或薄層板上測出。柱色譜、氣相色譜和液相色譜可用接于色譜柱出口處的各種檢測器檢測。柱色譜還可分部收集流出液后用適宜方法測定。



液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時間長(常有幾個小時)。液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。也稱現(xiàn)代液相色譜。

HPLC的特點和優(yōu)點

HPLC有以下特點：

高壓—壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米為75 Kg/cm2以上。

高速—流速為0.1~10.0 ml/min。

—可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。

高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。

色譜柱中的流動相會排干嗎？　　不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，制備液相，泵也不會將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復到正常狀態(tài)。


青海制備液相-賽爾夫科技由武漢賽爾夫科技有限公司提供?！吧V儀器和色譜消耗品”就選武漢賽爾夫科技有限公司，公司位于：湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)流芳大道52號，多年來，賽爾夫堅持為客戶提供好的服務，聯(lián)系人：黃經(jīng)理。歡迎廣大新老客戶來電，來函，親臨指導，洽談業(yè)務。賽爾夫期待成為您的長期合作伙伴！