色譜分離原理

液相色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法及分子排阻色譜法。

1.液固色譜法　使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相對(duì)組分吸附力大小不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)吸附-解吸附的平衡過(guò)程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。

2.液液色譜法　使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔(dān)體表面，或化學(xué)鍵合于擔(dān)體表面而形成的固定相，分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)分配平衡過(guò)程。

涂布式固定相應(yīng)具有良好的惰性;流動(dòng)相必須預(yù)先用固定相飽和，以減少固定相從擔(dān)體表面流失;溫度的變化和不同批號(hào)流動(dòng)相的區(qū)別常引起柱子的變化;另外在流動(dòng)相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復(fù)雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現(xiàn)在已很少采用?，F(xiàn)在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如C18、C8、氨基柱、基柱和柱。

反相色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類(lèi)和濃度決定，保留值通常隨鏈長(zhǎng)增長(zhǎng)或鍵合相的疏水性增強(qiáng)而增大．對(duì)于非極性化合物通常遵循以下規(guī)則：(弱)非鍵合硅膠《基<C1(TMS)<C3<C4<<C8≈C18(強(qiáng))。溶質(zhì)保留值與固定相表面積成正比，普通載體(80 A°)的比表面積約為250 m2/g，而300A°孔徑載體的比表面積約為60 m2/g。當(dāng)其他條件相同時(shí)，溶質(zhì)在300A°孔徑(低表面積)色譜柱上的保留值大約為80A°孔徑色譜柱上保留值的1/4(60：250)，小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨柱有利于強(qiáng)親水性樣品洗脫。樣品的保留值也可以通過(guò)改變流動(dòng)相組成或溶劑強(qiáng)度來(lái)調(diào)整，溶劑強(qiáng)度取決于的性質(zhì)和其在流動(dòng)相中的濃度。在反相色譜中，采用高溶劑強(qiáng)度、低極性的流動(dòng)相時(shí)可獲得較低的保留值。固定相的不同也可以導(dǎo)致選擇性發(fā)生變化，基柱、柱、C8柱、C18柱等的選擇性有很大差異，一般應(yīng)優(yōu)先考慮C8柱、C18柱，分離純化，然后是基柱，再次是柱。據(jù)統(tǒng)計(jì)，近80%的有機(jī)物及無(wú)機(jī)物可以用液相色譜法進(jìn)行分離．其中反相色譜中的C18柱是液相色譜中為常用的一類(lèi)色譜柱。

漏液：

液相色譜儀從流動(dòng)相瓶到廢液瓶之間的流路是一個(gè)全封閉體系，內(nèi)部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個(gè)部件發(fā)生漏液，那就是故障所在。

漏液的原因分兩種：

接觸硬件不當(dāng)：在更換零件如流路管或換柱時(shí)，換的接頭接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時(shí)期生產(chǎn)的液相柱接頭也有很大區(qū)別。當(dāng)然選項(xiàng)用PEEK接頭是一較好是一個(gè)較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手?jǐn)Q就能保證不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不當(dāng)也會(huì)漏液，一種不當(dāng)就是力度把握不好，擰得太緊或太松；另一種不當(dāng)就是致命的錯(cuò)誤：滑絲，這往往是動(dòng)手能力不太強(qiáng)，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯(cuò)誤，滑絲的后果不僅是漏液那么簡(jiǎn)單，常造成重要部件的報(bào)廢。解決這個(gè)問(wèn)題只能靠惡補(bǔ)基本功來(lái)實(shí)驗(yàn)，那就是擰螺絲。

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