色譜法的應用可以根據目的分為制備性色譜和分析性色譜兩大類。制備性色譜的目的是分離混合物,獲得一定數量的純凈組分,浙江制備液相色譜儀,這包括對有機合成產物的純化、天然產物的分離純化以及去離子水的制備等。相對于色譜法出現之前的純化分離技術如重結晶,色譜法能夠在一步操作之內完成對混合物的分離,但是色譜法分離純化的產量有限,只適合于實驗室應用。制備色譜到底是什么?(1)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(或者幾個)純物質的含量。制備色譜的目的,制備液相色譜儀品牌,是從混合物中得到純物質。為了加快分離的時間與提高分離的效率,制備色譜的的進樣品量很大,導致制備色譜柱子的分離負荷的相應加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長度,使用的相對多的流動相。然而,當色譜柱上樣品負載加大的時候,往往導致柱效急劇下降而得不到純的產品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,制備分離液相色譜儀,對重現性也要考慮。從經濟上來說。制備色譜要爭取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產品。(2)樣品的前處理:制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質。(3)固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。 有不少文獻報道,對填料可以進行一下處理提高了分離效果,如,對硅膠進行的(或緩沖液)處理。
超液相色譜法(HPLC)是繼氣相色譜之后,70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術?! 〕合嗌V是在氣相色譜和經典色譜的基礎上發(fā)展起來的。現代液相色譜和經典液相色譜沒有本質的區(qū)別。不同點僅僅是現代液相色譜比經典液相色譜有較高的效率和實現了自動化操作。經典的液相色譜法,流動相在常壓下輸送,所用的固定相柱效低,分析周期長。而現代液相色譜法引用了氣相色譜的理論,流動相改為高壓輸送(高輸送壓力可達4.9?107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經典液相色譜;同時柱后連有高靈敏度的檢測器,可對流出物進行連續(xù)檢測。因此,液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點。所以人們稱它為高壓、高速、或現代液相色譜法。

柱色譜法( Column chromatography)所用色譜管為內徑均勻、下端縮口的硬質玻璃管,下端用棉花或玻璃纖維塞住,管內裝有吸附劑。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時的流速,均按各單體中的規(guī)定。吸附劑的顆粒應盡可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果,除另有規(guī)定外通常多采用直徑為0.07-0.15mm的顆粒。吸附劑的活性或吸附力對分離效果有影響,應予注意。吸附劑的填裝 干法:將吸附劑一次加入色譜管,振動管壁使其均勻下沉,然后沿管壁緩緩加入開始層析時使用的流動相,或將色譜管下端出口加活塞,加入適量的流動相,旋開活使流動相緩緩滴出,然后自管頂緩緩加入吸附劑,使其均勻地潤濕下沉,在管內形成松緊適度的吸附層。操作過程中應保持有充分的流動相留在吸附層的上面。濕法:將吸附劑與流動相混合,制備液相色譜儀哪個品牌好,攪拌以除去空氣泡,徐徐傾入色譜管中,然后再加入流動相,將附著于管壁的吸附劑洗下,使色譜柱表面平整。俟填裝吸附劑所用流動相從色譜柱自然流下,液面將柱表面相平時,即加試樣溶液。試樣的加入 除另有規(guī)定外,將試樣溶于層析時使用的流動相中,再沿色譜管壁緩緩加入。注意勿使吸附劑翻起。或將試樣溶于適當的溶劑中。與少量吸附劑混勻,再使溶劑揮發(fā)去盡后使呈松散狀;將混有試樣的吸附劑加在已制備好的色譜柱上面。如試樣在常用溶劑中不溶解,可將試樣與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入。洗脫 除另有規(guī)定外,通常按流動相洗脫能力大小,遞增變換流動相的品種和比例,分別分部收集流出液,至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時,再改變流動相的品種和比例。操作過程中應保持有充分的流動相留在吸附層的上面。
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