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MTT檢測法,細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶,抗體稀釋液電話,能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan),并沉積在細(xì)胞中,死細(xì)胞則無此現(xiàn)象。接著用二甲亞砜(DMSO)溶解沉積在細(xì)胞中的甲瓚后,可利用酶標(biāo)490nm波長測光吸收值,依據(jù)吸光值(OD值)計(jì)算出細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),抗體稀釋液公司,吸光值與細(xì)胞活性成正比。
細(xì)胞老化的表現(xiàn):細(xì)胞折光性變差,鏡下可見細(xì)胞“變薄”,做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí),細(xì)胞死率會(huì)較高。但培養(yǎng)液不會(huì)發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象,泉州抗體稀釋液,仍清亮。(但如果是細(xì)菌污染的話,一般會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液的迅速變黃,混濁,鏡下可見大量繁殖的細(xì)菌;若是支原體污染的話,細(xì)胞也會(huì)失去正常形態(tài),會(huì)有細(xì)胞的死)。細(xì)胞的貼壁性減弱,開始有細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)液中。
在懸浮培養(yǎng)模式下,細(xì)胞可以通過不同的容器進(jìn)行擴(kuò)大:搖瓶、玻璃生物反應(yīng)器、不銹鋼生物反應(yīng)器、培養(yǎng)袋及一次性攪拌容器。有報(bào)道采用HEK293T細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增、轉(zhuǎn)染、慢病毒生產(chǎn)可以用一次性的生物反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)50L的規(guī)模。利用懸浮細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染大規(guī)模生產(chǎn)慢病毒是可行的,并且顯示出良好的產(chǎn)量。但是,在轉(zhuǎn)移到工業(yè)生產(chǎn)之前,該技術(shù)還需要進(jìn)一步完善。優(yōu)化的主要瓶頸是轉(zhuǎn)染過程本身,它需要大量質(zhì)粒DNA,從而使生產(chǎn)過程極其昂貴。
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