主要技術(shù)——凍存技術(shù)：1.液氮法：目前，細(xì)胞凍存尤為常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲l基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞，可以使冰點下降，提高細(xì)胞膜對水的通透性，且對細(xì)胞無明顯毒性。

注意事項：從原理上講，所有菌都可用瓷珠菌保存管保存。菌保存的原理是DNA-copy時自發(fā)突變導(dǎo)致菌退化，因此要創(chuàng)造代謝不活潑的狀態(tài)，干燥、低溫、缺氧、缺營養(yǎng)的環(huán)境，創(chuàng)造的環(huán)境越接近此狀態(tài)，所保存的菌的時間就越長。但需要注意的是，塑料冷凍管，由于苛刻菌(如流行感嗜血桿l菌、腦l膜炎萘瑟氏菌)等特殊細(xì)菌保存時，需-80℃或更低溫度保存，才可以做到更長期的保存。

玻璃化法：玻璃化保存(Vitrfication)是一種超l速冷凍方法。它是以極快的速度冷凍細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)外的游離水迅速形成玻璃樣物質(zhì)，而不形成冰晶。這種保存方法既避免了由于慢速降溫時導(dǎo)致的鹽濃度升高，又防止了由于冰晶形成造成的物理損傷，鞍山冷凍管，可獲得較高存活率。玻璃化首先由Luyet在1937年提出，冰箱冷凍管，他認(rèn)為生命是生物活l體系統(tǒng)的原子或其他結(jié)構(gòu)元的一種特殊排列，并且輕微的排列位置擾動就會破壞平衡從而導(dǎo)致死l亡，而結(jié)冰時的驅(qū)動力會破壞這種特殊的排列，這就是冰凍死l亡的原因。玻璃化比凍l結(jié)固化方法引起的結(jié)構(gòu)變化要小，因而是一種較理想的低溫保存途徑。

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