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PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)規(guī)范
區(qū)域氣壓調(diào)節(jié)
試劑準(zhǔn)備區(qū)和樣品處理區(qū)宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染,可以通過(guò)控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達(dá)到正壓效果;核酸擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)呈微負(fù)壓,以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品,可以通過(guò)控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達(dá)到負(fù)壓效果。PCR實(shí)驗(yàn)室緩沖區(qū)內(nèi)可設(shè)置正壓,使得室內(nèi)空氣不流向室外,室外空氣不流向室內(nèi)。
各區(qū)域通過(guò)氣壓調(diào)節(jié),使得在整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,試劑和樣品免受氣溶膠污染,并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)操作人員和環(huán)境的污染。另外各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人員流動(dòng)與氣流,形成單向流程的保護(hù)屏障,避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾,PCR實(shí)驗(yàn)室改造,防止核酸氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。
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PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制:各區(qū)域之間應(yīng)具備單間的實(shí)驗(yàn)工藝流、氣流、物流與人員流動(dòng),形成單向流程的保護(hù)屏障。避免實(shí)驗(yàn)室之間的相互干擾,也防止氣溶膠擴(kuò)散對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染。PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴(yán)格控制送風(fēng)、排風(fēng)的比例,以保證整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
PCR實(shí)驗(yàn)室裝飾:實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固,氣密性好; 所有陰陽(yáng)角宜采用圓弧過(guò)度;墻體內(nèi)壁光潔,不積塵、易清洗、易消毒、耐腐蝕;地面使用環(huán)氧樹脂自流坪或PVC卷材,材料應(yīng)滿足光潔、耐腐蝕、無(wú)縫隙、無(wú)滲漏的基本要求。
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PCR實(shí)驗(yàn)室為什么要進(jìn)行三區(qū)隔離?常見的三區(qū)是指:
1、試劑配制區(qū):PCR反應(yīng)體系的配制區(qū)域。
2、標(biāo)本處理區(qū):包括擴(kuò)增模板的制備,即提取DNA的地方。
3、PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū):進(jìn)行PCR擴(kuò)增的區(qū)域,也是擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳分析的區(qū)域。
如果將PCR擴(kuò)增區(qū)域和產(chǎn)物分析區(qū)再次分開,就是四區(qū)隔離。四區(qū)隔離,PCR實(shí)驗(yàn)室裝修,主要目的是防止氣溶膠在各個(gè)PCR區(qū)域之間的流動(dòng),好的方法是每個(gè)區(qū)域隔一幢樓,但操作起來(lái)不現(xiàn)實(shí),于是便有了針對(duì)不同區(qū)域設(shè)置正負(fù)壓的方法。
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