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食品公司核酸提取純化多重優(yōu)惠“本信息長(zhǎng)期有效”

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發(fā)布時(shí)間:2020-07-23 09:15  






廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。廣州勱博--養(yǎng)豬場(chǎng)PCR熒光定量PCR樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。

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據(jù)介紹,該發(fā)明公開了一種非洲病毒 CP530R 基因的熒光 PCR 檢測(cè)試劑及其制備方法與用途,設(shè)計(jì)合成了一套特異性的引物及 Taqman 探針和陽(yáng)性對(duì)照,并利用該引物及探針建立了一種快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高的熒光 PCR 檢測(cè)體系,可在 3~4 小時(shí)內(nèi)從被檢樣本中快速、準(zhǔn)確、特異、安全、簡(jiǎn)便地檢出 ASFV CP530R 基因,可用于來自家豬、和軟蜱的各種樣本中微量非洲病毒CP530R 基因的檢測(cè)。廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠熒光定量PCR相對(duì)定量可以對(duì)每個(gè)樣本中模版的其實(shí)水平之間的差異進(jìn)行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對(duì)水平不用使用標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以確定。

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非洲 ( ASF ) 是由非洲病毒 ( ASFV ) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病。不同的核酸序列,哪怕僅有一個(gè)堿基的差異,也會(huì)體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。從 20 世紀(jì) 60 和 70 年代i開始 ASF 由非洲蔓延至歐美地區(qū),2007 年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現(xiàn)了大面積流行,2018年8月也開始在我國(guó)快速蔓延開來,對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。因此,本方法為快速診斷非洲病毒,提供了有力的技術(shù)手段。



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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)者采購(gòu)生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗(yàn)其動(dòng)物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗(yàn)合格證明以及非洲病毒檢測(cè)結(jié)果(報(bào)告),確保購(gòu)進(jìn)的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒;采購(gòu)的進(jìn)口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗(yàn)檢疫合格證明。廣州勱博--生豬屠宰場(chǎng)病毒核酸提取系統(tǒng)經(jīng)銷根據(jù)動(dòng)物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級(jí)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)依法向屠宰場(chǎng)派駐(出)官i方獸醫(yī)實(shí)施屠宰檢疫。不得采購(gòu)沒有非洲病毒檢測(cè)結(jié)果(報(bào)告)及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品,確保豬肉制品和經(jīng)營(yíng)的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。

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所謂real-time Q-PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。研究表明,每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測(cè)PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過程。這兩個(gè)發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。



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熒光定量PCR技術(shù)產(chǎn)生并成熟于上世紀(jì)90年代,由于該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,能夠?qū)CR反應(yīng)的全過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,并且自動(dòng)化程度高,所以該技術(shù)從產(chǎn)生到現(xiàn)在短短的十幾年時(shí)間,在科研及檢驗(yàn)領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的一項(xiàng)重要技術(shù)。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)隨著PCR反應(yīng)的積累來實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR反應(yīng)的進(jìn)程,并通過分析軟件對(duì)PCR的反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)分析的技術(shù)。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。系統(tǒng)組成:定量PCR儀、電腦、分析軟件、試劑及耗材。

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進(jìn)行熒光定量PCR體系的配制時(shí)i好在冰上進(jìn)行,操作環(huán)境不用非得在超凈臺(tái)中進(jìn)行,環(huán)境安靜整潔都可以。因?yàn)槊恳粋€(gè)梯度要做三個(gè)重復(fù),因此先在1ml的無菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。實(shí)驗(yàn)中我使用過熒光定量八聯(lián)管和96孔板,個(gè)人推薦96孔板。廣州勱博--生豬屠宰場(chǎng)PCR熒光定量PCR最早稱TaqManPCR,后來也叫Real-TimePCR,是美國(guó)PE(PerkinElmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。因?yàn)榘寺?lián)管你需要蓋上蓋子,而且蓋子比較的難按下去,稍不慎就把八聯(lián)管弄斷或者液體撒出來。有的時(shí)候一下忘記了是從哪邊開始的。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。上機(jī)器前i好離心一下,讓貼在管壁上的液體流下來同時(shí)也消掉氣泡。


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一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋, 無法判斷產(chǎn)物量的變化。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值.

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什么是熒光定量PCR?常規(guī)PCR中,擴(kuò)增產(chǎn)物(擴(kuò)增子)是通過終點(diǎn)法來分析檢測(cè),即PCR反應(yīng)結(jié)束后,DNA通過瓊脂糖凝膠電泳,然后進(jìn)行成像分析。而熒光定量PCR可以在反應(yīng)進(jìn)行過程中進(jìn)行累積擴(kuò)增產(chǎn)物的分析和檢測(cè),即“實(shí)時(shí)”。在反應(yīng)體系中加入熒光分子,通過熒光信號(hào)的按比例增加來反應(yīng)DNA量的增加,使PCR產(chǎn)物的實(shí)時(shí)檢測(cè)成為可能。如采用常規(guī)的終點(diǎn)檢測(cè)法(利用EB染色來判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴(kuò)增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點(diǎn)熒光信號(hào)強(qiáng)度。滿足實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡臒晒饣瘜W(xué)物質(zhì)包括DNA結(jié)合染料和熒光標(biāo)記的序列特異引物或探針;專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測(cè)模塊,用于監(jiān)測(cè)擴(kuò)增時(shí)的熒光,檢測(cè)到的熒光信號(hào)反映了每個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。


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