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發(fā)布時間:2021-07-27 17:46  






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重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)基于重組酶聚合酶介導(dǎo)的擴(kuò)增原理,體外模擬生物體內(nèi) DNA 復(fù)印,在恒溫條件下即可對目的片段進(jìn)行擴(kuò)增,特別適用于快速檢測,特別適用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域,已被成功應(yīng)用到多種病原的快速檢測上。




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RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,反應(yīng)溫度在37°C左右。


重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動 DNA合成,對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的 DNA鏈與SSB結(jié)合,防止進(jìn)一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。



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對于核酸提取技術(shù)的不同,樣本裂解及核酸純化環(huán)節(jié)不盡相同,操作繁瑣程度不同,提取效率、核酸的純度亦會不同。而復(fù)雜的操作更易導(dǎo)致氣溶膠污染,帶來風(fēng)險。因此,選擇合適的提取技術(shù),對當(dāng)前疫情防控至關(guān)重要。



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