ELISA試劑盒的應(yīng)用技術(shù)

ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性夾心檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，這些就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。

ELISA試劑盒的發(fā)展前景

臨床測(cè)定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。分子生物學(xué)正在并肯定會(huì)讓對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)徹底的認(rèn)識(shí)，其對(duì)測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，對(duì)以些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定，并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。

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Elisa試劑盒原理及用途

本試劑盒采用間接競(jìng)爭ELISA方法檢測(cè)肌肉組織、牛奶等樣品中的米松（Dexamethasone，DEX），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的米松藥品和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭抗米松藥類，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含米松藥品含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中米松藥品的殘留量。

Elisa試劑盒技術(shù)原理

(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶標(biāo)記。

(2). 結(jié)合在固相載體表面a的抗原或仍保持其活性。

(3). 酶標(biāo)記的抗原或既保留其活性，又保留酶的活性。

(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

(5). 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測(cè)定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的有效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。